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組織消化（Tissue Dissociation）專題 — —原代細胞/腫瘤細胞制備
搜索關鍵詞：
組織消化 Tissue dissociation；原代細胞；腫瘤細胞；細胞外基質；消化酶；膠原酶；中性蛋白酶；透明質酸酶；木瓜蛋白酶；DNase I；胰酶；胰酶抑制劑；
基本描述：
細胞原代培養具有廣泛的生理意義，不僅可為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段，還可服務于臨床實踐，用于藥物篩選等前期研究。所謂原代培養就是將動物機體的各種組織，使用各種酶（比如胰蛋白酶、膠原酶）、螯合劑（如EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，并置于合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖，并保持原有的基本性質的過程。通常將第一代至第十代以內的細胞培養過程稱為原代培養。
原代培養最關鍵的一步便是獲得需要的原代細胞，并維持其最佳的細胞活力，以提高成功培養和后期研究的幾率。原代細胞制備最常用的方法即是酶解法，根據組織類型和對應的組織構造，常用以下一種或者多種酶組合的方法來達到水解目的。
1. 膠原酶 Collagenase
作為一種蛋白水解酶，常用來消化細胞外基質蛋白。作為一種肽鏈內切酶，膠原酶特異性識別Pro-X-Gly-Pro序列（高頻出現在膠原collagen，很少在其他蛋白中發現）并切割氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之間的肽鍵。不同于其他蛋白酶，膠原酶是唯一一種可識別并降解具三股超螺旋結構的天然膠原纖維，這種膠原纖維廣泛存在結締組織。
我司（MKbio，懋康生物）提供的膠原酶來源于溶組織梭菌（Clostridium histolyticum），是一種酶粗提物，不僅含有梭菌蛋白酶A（Clostridiopeptidase A），能夠降解天然膠原和網狀纖維；還含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分別用以水解存在結蹄組織和上皮組織細胞外基質內的其他蛋白、多糖和脂質等。目前商業化的膠原酶因所含組分的差異，并結合科研團體的科研成果，應用上分類見下：
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膠原酶類型 |
組分特征和應用 |
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I型膠原酶（Type 1） |
相對均量的多種酶活（包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）；通常用作上皮細胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織的細胞制備。 |
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II型膠原酶（Type 2） |
含更高的梭菌蛋白酶活性；通常用作心臟、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織的細胞制備。 |
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III型膠原酶（Type 3） |
含較低的蛋白水解活性；常用于乳腺細胞的制備； |
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IV型膠原酶（Type 4） |
含較低的胰酶活性；通常用于胰島制備，和維持受體完整性比較重要的其他研究。也可用于髓系細胞制備。 |
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V型膠原酶（Type 5） |
部分純化型，含更高的膠原酶和酪蛋白活性，更低胰酶水平以降低對膜蛋白和受體造成損傷。適用于胰島制備。 |
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MX1001-100MG |
Collagenase I 膠原酶I型（Type 1） |
100mg |
280 |
現貨 |
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MX1001-500MG |
Collagenase I 膠原酶I型（Type 1） |
5×100mg |
1260 |
現貨 |
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MX1001-1000MG |
Collagenase I 膠原酶I型（Type 1） |
10×100mg |
2200 |
現貨 |
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MX1002-100MG |
Collagenase I 膠原酶I型（Type 2） |
100mg |
280 |
現貨 |
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MX1002-500MG |
Collagenase I 膠原酶I型（Type 2） |
5×100mg |
1260 |
現貨 |
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MX1002-1000MG |
Collagenase I 膠原酶I型（Type 2） |
10×100mg |
2200 |
現貨 |
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MX1003-100MG |
Collagenase III 膠原酶III型（Type 3） |
100mg |
740 |
現貨 |
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MX1003-1000MG |
Collagenase III 膠原酶III型（Type 3） |
1g |
3800 |
現貨 |
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MX1004-100MG |
Collagenase IV 膠原酶IV型（Type 4） |
100mg |
280 |
現貨 |
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MX1004-500MG |
Collagenase IV 膠原酶IV型（Type 4） |
5×100mg |
1260 |
現貨 |
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MX1004-1000MG |
Collagenase IV 膠原酶IV型（Type 4） |
10×100mg |
2200 |
現貨 |
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MX1005-100MG |
Collagenase V 膠原酶V型（Type 5） |
100mg |
740 |
現貨 |
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MX1005-1000MG |
Collagenase V 膠原酶V型（Type 5） |
1g |
3800 |
現貨 |
2. 中性蛋白酶Dispase II
中性蛋白酶（Neutral protease），商業名稱dispase II，也稱分散酶II。來源于Bacillus polymyxa，無支原體或其他動物病毒污染。一種非特異性金屬蛋白酶，具比較溫和的蛋白水解酶活性，對細胞損傷小且可維持細胞膜完整性，因此非常適合用于分離原代和繼代細胞培養。研究顯示Dispase II更能有效消化成纖維樣細胞，相比較于上皮樣細胞。Dispase II還可用于消除懸浮細胞培養過程中發生的細胞聚集。
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MX1006-100MG |
Dispase II 分散酶II（中性蛋白酶） |
100mg |
550 |
現貨 |
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MX1006-1000MG |
Dispase II 分散酶II（中性蛋白酶） |
1g |
2150 |
現貨 |
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04942078001 |
Dispase II 分散酶II（中性蛋白酶） |
1g |
2250 |
Roche原裝，現貨 |
3. 胰蛋白酶Trypsin
胰蛋白酶（胰酶，Trypsin），來源于胰腺的一種絲氨酸蛋白酶，由223個氨基酸殘基組成的單鏈多肽，底物特異性是帶正電荷的賴氨酸和精氨酸側鏈。胰酶主要切割賴氨酸和精氨酸羧基端，當兩者之一緊隨為脯氨酸的情況除外。另外，當切割位點任一邊緊鄰酸性殘基，胰酶水解速率也會減緩。
胰蛋白酶（胰酶，Trypsin），以無活性的胰蛋白酶原（Trypsinogen）形式分泌于胰腺中，通過切割其末端六肽而得到活化，產生天然單鏈形式的β-胰酶（β-Trypsin），隨后進行有限的自發裂解產生具水解活性的α-Trypsin（由二硫鍵共價連接的二條肽鏈組成）。胰酶水解活性可被多種化合物所抑制，有1）來源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白酶抑制劑；2）銀離子；3）有機磷化合物，如氟磷酸異丙酯DFP；4）特定蛋白酶抑制劑，如AEBSF、抗蛋白酶、抑肽酶、PMSF、TLCK等；
胰蛋白酶（胰酶，Trypsin）的應用如下：
1）組織消化，需要配合其他蛋白酶如膠原酶和彈性蛋白酶一起使用；2）胰酶消化以收集細胞；3）線粒體分離；4）體外蛋白研究；5）從塑料或者玻璃培養表面消化以去除單細胞層；6）多種血細胞凝集過程；7）流式DNA分析的樣品制備；8）胰酶消化肽圖譜；9）指紋和測序研究；10）環境監測；11）降低組織培養的細胞密度；12）細胞亞培養；13）融合蛋白切割；14）純化糖蛋白內消化得到糖肽。
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MX2002-25G |
Trypsin 1:250 (Porcine) 豬源胰蛋白酶1:250（粉末） |
25g |
180 |
現貨 |
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MX2002-100G |
Trypsin 1:250 (Porcine) 豬源胰蛋白酶1:250（粉末） |
100g |
540 |
現貨 |
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MX2003-100ML |
Trypsin (0.25%), Phenol Red 胰酶溶液（0.25%），含酚紅 |
100ml |
120 |
現貨 |
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MX2004-100ML |
Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol Red 胰酶-EDTA溶液（0.25%），含酚紅 |
100ml |
130 |
現貨 |
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另，特別提供TPCK處理胰酶（TPCK可滅活胰酶混有的胰凝乳蛋白酶chymotryptic活性，得到更純和更高特異性的胰酶）。我司提供兩種級別的TPCK-胰酶，分別達到組織培養和蛋白測序級。 |
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MX2005-100MG |
Trypsin, TPCK Treated 胰蛋白酶（TPCK處理）（組織培養級） |
100mg |
469 |
現貨 |
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MX2006-100MG |
Trypsin, TPCK Treated 胰蛋白酶（TPCK處理）（蛋白測序級） |
100mg |
499 |
現貨 |
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MX2006-500MG |
500mg |
1499 |
現貨 |
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Worthington LS02120 |
Trypsin, Modified, Sequencing Grade（TPCK處理） |
4x25 ug |
299 |
原裝進口，2周 |
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Worthington LS02115 |
Trypsin, Purified, Sequencing Grade II（TPCK處理） |
4x25 ug |
1175 |
原裝進口，2周 |
4. Elastase 彈性蛋白酶
彈性蛋白酶（Elastase），是另一種胰腺來源的絲氨酸蛋白酶，特異性識別并切割僅次于中性氨基酸的肽鍵。在所有蛋白酶中彈性蛋白酶非常獨特，因其能水解天然彈力素。在血液和細菌內都有發現彈性蛋白酶。研究發現，彈性蛋白酶很適合用來消化肺臟以分離肺泡II型細胞。
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MX1010-25MG |
Elastase, from Porcine Pancreas 彈性蛋白酶（豬胰腺） |
25mg |
560 |
原裝進口，2周 |
5. Hyaluronidase透明質酸酶
透明質酸酶（Hyaluronidase）是一類能夠降低體內透明質酸活性的酶的總稱，一種糖蛋白，能隨機裂解透明質酸，軟骨素和硫酸軟骨素中的β-N-乙酰己糖胺-[1→4]糖苷鍵。常與粗制蛋白酶，如膠原酶Collagenase，聯合使用于組織中分離活細胞。
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貨號 |
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貨期 |
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MX1007-100MG |
Hyaluronidase 透明質酸酶 |
100mg |
145 |
現貨 |
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MX1007-1000MG |
Hyaluronidase 透明質酸酶 |
1g |
925 |
現貨 |
6. Papain 木瓜蛋白酶
木瓜蛋白酶Papain，一種半胱氨酸蛋白酶，具有廣泛且特異的切割活性。相比較于胰腺蛋白酶如胰酶，彈性蛋白酶，能降解大多數的蛋白底物。常用來分離組織內的神經元材質。三陰乳腺癌研究常使用木瓜蛋白酶分離Fab片段加速PET掃描，以改善疾病治療。
木瓜蛋白酶的應用如下：1）比其他蛋白酶更溫和的細胞分離（比如皮層神經元，視網膜，和平滑?。?；2）蛋白結構研究，多肽圖譜；3）紅細胞表面修飾用于抗體篩選或鑒定；4）對IgG和IgM抗體處理以制備Fab；5）嵌入膜蛋白溶解；6）處理純化的蛋白聚糖以生產糖肽；7）酶法傷口清創。
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MX1008-25G |
Papain, BC Grade 木瓜蛋白酶（試劑級） |
25g |
115 |
現貨 |
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MX1008-100G |
Papain, BC Grade 木瓜蛋白酶（試劑級） |
100g |
325 |
現貨 |
7. DNase I 脫氧核糖核酸酶I
脫氧核糖核酸酶I（Deoxyribonuclease I，DNase I）常用在酶法細胞分離實驗過程中，以降解消化體系內殘留的核酸從而增加粘度和活力。DNaseI不會破壞細胞完整性。
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MF0401-15KU |
Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas 脫氧核糖核酸酶I，來源于牛胰腺 |
15KU |
380 |
原裝進口，2周 |
8. Trypsin Inhibitor 胰酶抑制劑
胰酶抑制劑 Trypsin inhibitor，有多種來源。
本公司（MKbio）提供的為大豆源的胰酶抑制劑，能夠失活胰酶活性，因此有時用于一些特定的細胞分離過程。
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MX1009-1G |
Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰酶抑制劑 |
1g |
1659 |
現貨 |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。
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