microRNA（miRNA）是一類(lèi)小片段單鏈RNA , 最初是在核內由RNA聚合酶轉錄形成具有帽子結構（7MGpppG）和多聚腺苷酸尾巴（AAAA）的pri-miRNA，pri-miRNA在核酸酶Drosha及其輔助因子Pasha的作用下被處理成約70個(gè)核苷的pre-miRNA。pre-miRNA被運輸出核后再由另外一個(gè)核酸酶Dicer將其剪切形成約22個(gè)核苷酸的成熟miRNA。成熟的miRNA 與RISC組裝成RNA誘導的沉默復合體，通過(guò)堿基互補配對的方式識別靶mRNA，并根據互補程度的不同指導沉默復合體降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻譯。

圖示1：miRNA的成熟過(guò)程

★ 服務(wù)內容
1：miRNA 的過(guò)表達慢病毒包裝
我公司采用擴增pri-miRNA及其兩端的天然側翼序列來(lái)構建miRNA的過(guò)表達質(zhì)粒，并包裝慢病毒。以實(shí)現miRNA在體外（內）的高表達。該方法相比化學(xué)合成的miRNA，具有可持續性表達，并且能用于難轉染（例如干細胞，懸浮細胞等）細胞等優(yōu)點(diǎn)。比pre-miRNA和mature miRNA 形式的過(guò)表達，具有表達效果更好，更能模擬體內天然的成熟過(guò)程。

2：miRNA的抑制
我公司采用TuD RNA（Tough Decoy RNA）的設計方法構建miRNA的抑制慢病毒載體。TuD RNA不同于以往的單鏈RNA，它是含有頸環(huán)結構的雙鏈RNA , 能夠抵抗胞內核酸酶的降解，讓miRNA抑制可持續一個(gè)月以上。并且，TuD RNA的兩條鏈都包含一個(gè)miRNA結合位點(diǎn)，能夠更高效地隔離濃度較低的目標miRNA。因此，相比其它方法，TuD RNA能夠更長(cháng)效的抑制miRNA。

圖示2：TuD RNA的工作原理
3：miRNA的靶基因驗證
由于miRNA是通過(guò)其seed sequence（5’端2-8位核苷酸）與靶基因的3’UTR結合抑制靶基因的表達。因此，我們將待定目的基因的3’UTR區域構建至報告基因luciferase的后面，通過(guò)比較實(shí)驗組和對照組報告基因表達的改變（監測熒光素酶的活性變化）來(lái)間接反映miRNA對目的基因的抑制作用。同時(shí)結合定點(diǎn)突變等方法進(jìn)一步確認miRNA與靶基因3’UTR的作用位點(diǎn)。

★  服務(wù)說(shuō)明
1：客戶(hù)只需提供miRBase數據庫中的miRNA編號，我們就可以按照您的要求完成相關(guān)實(shí)驗。
2：miRNA的過(guò)表達效果受諸多因素影響，與對照組相比，可以提高2—1000倍（如果本底表達水平較低，可以達到較好的過(guò)表達效果，如果本底表達水平較高，過(guò)表達效果會(huì )相對較低）。
3：我們提供多個(gè)microRNA慢病毒載體供客戶(hù)選擇（見(jiàn)下方載體信息）；

★ 客戶(hù)所得
1：符合客戶(hù)要求的產(chǎn)品（質(zhì)粒+甘油菌 或者 病毒+polybrene）；
2：完整的電子版實(shí)驗報告（包括實(shí)驗材料，步驟，載體圖譜等）；
3：完整的測序報告；