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	    	RNAi平臺
	    	>RNAi穩轉株構建服務(wù)
        
	        
        RNAi穩轉株構建服務(wù)
        
	        
        
	        	時(shí)間：2016-05-11    
	        	
	        	作者：懋康生物    
	        	
	        	
	        
        
	        
        
	        	★ 服務(wù)描述
        
shRNA穩轉株是指能持續穩定表達干擾特定基因shRNA的細胞。RNA干擾是基因功能研究中最常用的手段之一。懋康生物利用慢病毒將shRNA序列整合入細胞基因組，并通過(guò)慢病毒載體攜帶的抗性基因（通常為新霉素，嘌呤霉素，潮霉素）篩選出穩定轉染shRNA的細胞，使其成為shRNA穩定轉染細胞系。         

        
	
        

        

        
	★ 服務(wù)內容
        
1：shRNA干擾靶點(diǎn)序列的設計；
        
2：shRNA 慢病毒質(zhì)粒的構建；
        
3：shRNA慢病毒包裝與病毒滴度測定；
        
4：:病毒感染靶細胞并從RNA水平（Real-time PCR）和/或蛋白水平（Western Blot）驗證干擾效果；          

        

        
	5：選出干擾效果最好的細胞，利用慢病毒載體攜帶的抗性基因篩選建立穩定細胞系； 

        
 

        
	
        

        

        
	★ 服務(wù)說(shuō)明 
        
1：我們的RNA干擾服務(wù)針對所有的哺乳動(dòng)物細胞，暫不提供植物和原核生物的RNA干擾服務(wù)；
        
 2：RNA干擾的對象可以是編碼蛋白的mRNA序列，也可以是長(cháng)的非編碼RNA(lncRNA)序列；
        
3：針對不同的靶基因，我們一般設計3-4條干擾序列，保證至少有一條序列干擾效果大于70%（RNA水平）；
        
4：我們提供多個(gè)慢病毒干擾載體供客戶(hù)選擇（見(jiàn)下方載體信息）；
        
5：對于干擾效果的驗證，客戶(hù)可以選擇只從RNA水平（或蛋白水平）進(jìn)行驗證，也可選擇兩個(gè)水平都進(jìn)行驗證（lncRNA無(wú)法從蛋白水平驗證）；
        
6：靶細胞和Western Blot 實(shí)驗需要的一抗由客戶(hù)提供，也可委托我公司代購；
        
7：Real-time PCR采用SYBR Green 法 三復孔進(jìn)行干擾效果驗證，確保實(shí)驗結果真實(shí)可信； 

        
 

        
	
        

        

        
	★ 客戶(hù)所得 

        

        
	1：構建好的慢病毒干擾質(zhì)粒，剩余病毒及穩轉株細胞； 

        

        
	2：完整的實(shí)驗報告（包括實(shí)驗材料，實(shí)驗步驟，實(shí)驗結果等）及慢病毒使用操作說(shuō)明書(shū)一份； 

        

        
	 
	
        
	        ★ 服務(wù)周期
        
從靶點(diǎn)設計到穩轉株完成總共需要45個(gè)工作日； 

        

        
	 
	
        
	★         載體信息 

        

        
	
        
		
			
        
				
					
        
						載體編號 
					
        
				        		
				
					
        
						篩選標記 
					
        
				        		
				
					
        
						載體骨架主要元件 
					
        
				        		
			
        
			
        
				
					
        
						熒光 
					
        
				        		
				
					
        
						真核抗性 
					
        
				        		
			
        
			
        
				
					
        
						pHY-LV-KD1.1 
					
        
				        		
				
					
        
						GFP 
					
        
				        		
				
					
        
						無(wú) 
					
        
				        		
				
					
        
						U6-shRNA-CMV-GFP 
					
        
				        		
			
        
			
        
				
					
        
						pHY-LV-KD1.2 
					
        
				        		
				
					
        
						RFP 
					
        
				        		
				
					
        
						無(wú) 
					
        
				        		
				
					
        
						U6-shRNA-CMV-RFP 
					
        
				        		
			
        
			
        
				
					
        
						pHY-LV-KD1.4 
					
        
				        		
				
					
        
						無(wú) 
					
        
				        		
				
					
        
						Puromycin 
					
        
				        		
				
					
        
						U6-shRNA-CMV-Puromycin 
					
        
				        		
			
        
			
        
				
					
        
						pHY-LV-KD2.1 
					
        
				        		
				
					
        
						GFP 
					
        
				        		
				
					
        
						無(wú) 
					
        
				        		
				
					
        
						U6-shRNA-EF1α-GFP 
					
        
				        		
			
        
			
        
				
					
        
						pHY-LV-KD3.1 
					
        
				        		
				
					
        
						GFP 
					
        
				        		
				
					
        
						無(wú) 
					
        
				        		
				
					
        
						U6-shRNA-UBC-GFP 
					
        
				        		
			
        
			
        
				
					
        
						pHY-LV-KD5.1 
					
        
				        		
				
					
        
						GFP 
					
        
				        		
				
					
        
						Puromycin 
					
        
				        		
				
					
        
						U6-shRNA-CMV-GFP-PGK- Puromycin 
					
        
				        		
			
        
			
        
				
					
        
						pHY-LV-KD5.2 
					
        
				        		
				
					
        
						RFP 
					
        
				        		
				
					
        
						Puromycin 
					
        
				        		
				
					
        
						U6-shRNA-CMV-RFP-PGK- Puromycin 
					
        
				        		
			
        
			
        
				
					
        
						pHY-LV-KD5.4 
					
        
				        		
				
					
        
						GFP 
					
        
				        		
				
					
        
						Puromycin 
					
        
				        		
				
					
        
						U6-shRNA-UBC-GFP-PGK- Puromycin 
					
        
				        		
			
        
		        
	
        

        
			
        
			
        
			 	
				
        
				
				
				
				
				
				
				
        
				
				
				
			
        
			
        
			
		
        
	  
        
	
         
	

        
	
        
    	
        
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