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        Cell-Tracker細胞示蹤/細胞追蹤熒光探針專(zhuān)題
        時(shí)間:2021-09-10     作者:懋康生物     文章來(lái)源:懋康生物原創(chuàng )    

        Cell-Tracker細胞示蹤/細胞追蹤熒光探針專(zhuān)題
        Cell-Tracker Fluorescent Probes

        關(guān)鍵信息:

        Cell-Tracker系列示蹤探針藍色、綠色、橙色、紅色、深紅色,多重標記;短中期示蹤;


        專(zhuān)題標簽:

        Cell Tracking 細胞示蹤;Cell movement 細胞運動(dòng);Cell-Tracker Green CMFDA;Cell-Tracker Orange CMTMR;Cell-Tracker Red CMTPX;Cell-Tracker Deep Red;


        背景需求:

        細胞運動(dòng)和定位研究需要專(zhuān)門(mén)的探針染料,首先必須要對活細胞無(wú)毒性,還要同時(shí)具有多種熒光顏色可供選擇,以便與不同的儀器激光波長(cháng)和濾光片匹配并能與抗體標記或其他細胞分析標記探針共染色。


        檢測細胞運動(dòng)和定位的最簡(jiǎn)單方法就是使用具有膜通透性的探針染料進(jìn)入細胞并在加載后轉變?yōu)槟し峭ㄍ感缘漠a(chǎn)物。理想的細胞示蹤染料需要可存留于分裂多代后的子細胞中,但不會(huì )通過(guò)接觸轉移到相鄰細胞中。Cell-Tracker系列示蹤染料就是在這樣的背景下開(kāi)發(fā)而來(lái):在工作濃度下保持穩定且無(wú)細胞毒性,可穩定存留在細胞中,且在生理 pH 條件下可發(fā)出明亮的熒光。Cell-Tracker示蹤熒光染料還具有多種發(fā)射光譜,可輕松與抗體標記結合使用。


        產(chǎn)品描述:

        Cell-Tracker熒光探針是用來(lái)監測細胞運動(dòng)、定位、增殖、遷移、趨化和侵襲的優(yōu)秀工具。

        Cell-Tracker熒光探針能自由穿透細胞膜進(jìn)入細胞,在胞內轉化生成不具細胞膜滲透性的反應產(chǎn)物。Cell-Tracker熒光探針(除了Cell-Tracker Deep Red)含有一氯甲基或溴甲基基團,與巰基反應,利用谷胱甘肽S轉移酶介導的催化作用。大多數細胞中谷胱甘肽含量很高(高達10mM),谷胱甘肽轉移酶普遍存在。Cell-Tracker Deep Red含一琥珀酰亞胺酯反應基團,與蛋 白上的胺基反應。一旦轉化為不可逆產(chǎn)物,這些產(chǎn)物幾次傳代都能良好的保留在活細胞中。在細胞群內,染料只會(huì )轉移到子代細胞,不會(huì )轉移到鄰近細胞。

        Cell-Tracker探針特地設計使其至少72h(典型有3~6代)能展示熒光,此染料表現出理想的示蹤特征:穩定、工作濃度下無(wú)毒性、良好保留在細胞,且在生理pH下呈明亮熒光。


        重要特征:

        ① 可快速加載標記(通常 15 分鐘至 1 小時(shí))

        ② 短期追蹤(一般 3-6代或72h

        ③ 具有較強的耐光漂白/抗光淬滅特性

        ④ 熒光信號亮度適中

        ⑤ 信號分布于整個(gè)細胞

        ⑥ 適合熒光顯微鏡和HCS檢測

        ⑦ 提供多種發(fā)射光譜的Cell-tracker示蹤探針,適合多標實(shí)驗(見(jiàn)表1)。

        1. Cell-Tracker熒光探針的光譜特征

        貨號

        名稱(chēng)

        分子量

        常用檢測通道

        Ex/Emnm[1]

        MX4107-100UG

        Cell-Tracker Green CMFDA

        464.9

        FITC

        492/517 [2]

        MX4108-100UG

        Cell-Tracker Orange CMTMR

        554.0

        TRITC

        541/565

        MX4109-100UG

        Cell-Tracker Red CMTPX

        686.3

        Rhodamine

        577/602

        MX4110-30UG

        Cell-Tracker Deep Red

        698.3

        Cy5

        630/650

        MX4112-5MG
        Cell-Tracker Blue CMAC 
        209.6 DAPI 353/466

        [1] 最大吸收和發(fā)射熒光,在水溶性緩沖液或甲醇內確定。在細胞環(huán)境內熒光值可能有些許變化。

        [2] CMFDA本身無(wú)色和無(wú)熒光,直至胞內酯酶切割掉酯化基團。酯化基團的水解得到產(chǎn)物的熒光特征如表所述。


        染色示例:

         

        Fig 1. Co-culture of CellTracker? labelled fibroblasts (green) and hESMPs (red) on bilayer membranes of either PHBV–PLA or PHBV–PCL. Ref.Frazer J. Bye et al. Development of bilayer and trilayer nanofibrous/microfibrous scaffolds for regenerative medicine. Biomater. Sci., 2013, 1, 942-951.


         

        Fig 2. Measuring O2 exchange in RBCs using single-cell O2-saturating imaging. (C) Wild-type RBCs loaded with a mixture of Deep-Red and Green, showing fluorescence in oxygenated and deoxygenated microstreams. Ref.Sarah L. Richardson, Alzbeta Hulikova, Melanie Proven, Ria Hipkiss, Magbor Akanni, Noémi B. A. Roy, Pawel Swietach. Single-cell O2 exchange imaging shows that cytoplasmic diffusion is a dominant barrier to efficient gas transport in red blood cells.Proceedings of the National Academy of Sciences May 2020, 117 (18) 10067-10078;


        訂購信息:

        貨號

        產(chǎn)品名稱(chēng)

        規格

        價(jià)格(元)

        MX4107-100UG

        Cell-Tracker Green CMFDA 活細胞示蹤探針(綠色)

        2×50μg

        995

        MX4108-100UG

        Cell-Tracker Orange CMTMR 活細胞示蹤探針(橙色)

        2×50μg

        1100

        MX4109-100UG

        Cell-Tracker Red CMTPX 活細胞示蹤探針(紅色)

        2×50μg

        980

        MX4110-30UG

        Cell-Tracker Deep Red 活細胞示蹤探針(深紅色)

        2×15μg

        788

        MX4112-5MG
        Cell-Tracker Blue CMAC 活細胞示蹤探針(藍色)
        5mg
        1598

        MX4111-1Kit

        Cell-Tracker Three-color Trial Kit (Green/Red/Deep red) 活細胞示蹤三色組合試劑盒(綠色/紅色/深紅色)

        1kit

        1568

         

        常見(jiàn)問(wèn)題(陸續加更中。。。。。。)

         我的實(shí)驗需要做細胞遷移研究(約4h),需要對細胞做熒光標記,有推薦的產(chǎn)品?

        比如:可選擇鈣黃綠素(Calcein AM)和二乙酸熒光素(FDA)來(lái)做此用途。由于這些染料不會(huì )插入或共價(jià)結合到任何其它細胞成分,它們在胞內的滯留時(shí)間比較短,因為某些細胞類(lèi)型可能極其活躍的將染料泵出細胞。像Cell-Tracker系列染料,包含要么溫和巰基反應的氯甲基基團要么胺基反應的NHS基團,使得探針共價(jià)結合到細胞內容物中,使得具更好的滯留效果。不管是哪種探針,用戶(hù)根據經(jīng)驗來(lái)確定在所用細胞類(lèi)型內的滯留時(shí)間。


         我的實(shí)驗用Calcein AM來(lái)標記細胞,但第二天成像,發(fā)現沒(méi)有熒光信號,為什么?

        鈣黃綠素(Calcein AM,MX3011)是良好的細胞示蹤探針,以及常用的細胞質(zhì)染料。但,不會(huì )與胞內內含物結合,可能幾個(gè)小時(shí)就會(huì )被細胞泵出體外。鈣黃綠素在活細胞內的滯留時(shí)間取決于不同細胞的內在特征和培養條件。

        如果要做長(cháng)期成像,更推薦使用具反應性的細胞質(zhì)染料比如:CFDA SEMX4104-25MG)或Cell-tracker示蹤探針。


        我的實(shí)驗對兩種細胞染色,一種用Cell-tracker green,一種用Cell-tracker Red,但看起來(lái)紅色與綠色染色細胞間有交叉干擾,為什么?

        一種可能性是染料間存在光譜滲透??赏ㄟ^(guò)檢查單一染色細胞,比如:對于紅色染料標記細胞,用綠色熒光來(lái)檢測;對于綠色染料標記細胞用紅色熒光來(lái)檢測,用另一種顏色的對應濾片來(lái)成像檢測。通過(guò)對這些對照的觀(guān)察,發(fā)現有光譜滲透,可通過(guò)降低染料標記濃度來(lái)降低染料亮度,或使用光譜間隔更大的染料重新標記。如果不存在光譜滲透,還有一種可能性是染色后細胞并未充分清洗,使得某些未插入的染料保留在新的染色體系內進(jìn)而標記上其它細胞。增加清洗次數和延長(cháng)時(shí)間有可能改變這個(gè)問(wèn)題。

         

        ——Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】


        上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗室消耗品與實(shí)驗服務(wù)工作,主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承以人為本,以誠為信、合同守信的經(jīng)營(yíng)理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

         

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