結腸癌造模誘導劑（Wako/Sigma）

偶氮甲烷（Azoxymethane，AOM）

基本描述：

偶氮甲烷（氧化偶氮甲烷），英文Azoxymethane，縮寫(xiě)AOM，可有效誘導大小鼠結腸癌，廣泛用作一種基質(zhì)引起實(shí)驗動(dòng)物發(fā)生結腸腫瘤，從而研究癌癥預防物和癌癥形成機制。另外，越來(lái)越多結腸癌病例的發(fā)生，使得癌癥預防物的研究也越來(lái)越流行。按照每周一次皮下注射AOM（15mg/kg體重）進(jìn)入大鼠體內，連續3周給藥。數周后能觀(guān)察到癌前期病變。

作用機制：偶氮甲烷（AOM）能誘導DNA產(chǎn)生O6-甲基鳥(niǎo)嘌加合物，導致G→A轉化。

主要應用：偶氮甲烷（AOM）常聯(lián)合DSS（Mw：36000-50000 Da）注射動(dòng)物，建立結腸癌模型，用來(lái)研究癌癥發(fā)展機制和化學(xué)預防。

基本特征：

1）  CAS NO. 25843-45-2

2）  線(xiàn)性分子式：CH3N=N(→O)CH3【C2H6N2O】

3）  分子量：74.08

4）  純度：≥98%

5）  結構式：

結腸癌（Colon cancer）模型建立案例：

1、  文獻來(lái)源：Wirtz S, et al. Chemically induced mouse models of intestinal inflammation. Nat Protoc. 2007; 2(3):541-6.

1.1    DSS溶液制備（2% DSS溶液）：溶解10gDSS于500ml無(wú)菌的飲用水中，使用前溶液保存在4℃，最好現配現用。

1.2    AOM溶液制備：用無(wú)菌水溶解AOM配制10 mg/ml的儲存液，分裝后放到-20℃保存，避免反復凍融。使用之前，融化分裝母液并用無(wú)菌生理鹽水1:10倍稀釋。

1.3    小鼠結腸炎相關(guān)的依賴(lài)性結直腸癌造模方法

1）  第1天稱(chēng)重和標記小鼠；

2）  按10 mg/kg體重的劑量腹腔注射AOM溶液；

3）  加DSS溶液灌滿(mǎn)小鼠籠內的飲水槽，以5ml DSS溶液/小鼠/天加量，對照小鼠加等體積不含DSS的飲用水；

4）  第3天清空籠子內剩余的DSS飲用水，過(guò)兩天重新裝滿(mǎn)DSS溶液；

5）  第5天清空籠子內剩余的DSS飲用水，重新裝滿(mǎn)DSS溶液；

6）  第8天清空籠子內剩余的DSS溶液，換上不含DSS的無(wú)菌水持續14天；

7）  第22-26天重復第3）-5）步；

8）  第29天清空籠子內剩余的DSS溶液，換上不含DSS的無(wú)菌水持續14天；

9）  第43-47天重復第3）-5）步；

10）第50天清空籠子內剩余的DSS溶液，換上不含DSS的無(wú)菌水；

2、文獻來(lái)源：Neufert C, et al. An inducible mouse model of colon carcinogenesis for the analysis of sporadic and inflammation-driven tumor progression. Nat Protoc. 2007; 2(8):1998-2004.

2.1 DSS溶液制備（2.5% DSS溶液）：稱(chēng)取2.5g DSS溶于100ml無(wú)菌水，本溶液置于4℃可穩定保存1周。最好現配現用。

2.2 AOM溶液制備：用無(wú)菌水溶解AOM配制10 mg/ml的儲存液，分裝后放到-20℃保存，避免反復凍融。AOM在水或生理鹽水中的穩定性高于PBS緩沖液，且在玻璃管內穩定性好于塑料管。使用之前，融化分裝母液并用無(wú)菌生理鹽水1:10倍稀釋。

2.3 小鼠結腸癌造模方法

1）第1天稱(chēng)重，等數分組并標記小鼠；

2）按照10mg/kg體重的濃度計算所需的AOM量，取適量的AOM儲存液（10mg/ml）用無(wú)菌生理鹽水1:10倍稀釋。

3）腹腔注射AOM工作液（劑量10mg/kg體重，則10g體重小鼠注射100ul工作液）到實(shí)驗組小鼠，同時(shí)注射等體積的無(wú)菌生理鹽水到對照組小鼠。

4）自此步之后，按照兩種方法繼續實(shí)驗。若建立自發(fā)性腫瘤進(jìn)展模型，見(jiàn)方案A；若建立慢性炎癥驅動(dòng)的腫瘤進(jìn)展模型，見(jiàn)方案B。

方案A，自發(fā)性腫瘤進(jìn)展模型

A1，第8天重復步驟1）-3）；

A2，第15天重復步驟1）-3）；

A3，第22天重復步驟1）-3）；

A4，第29天重復步驟1）-3）；

A5，第36天重復步驟1）-3）；【到這步每只小鼠都腹腔注射給藥6次】

A6，第一次注射后的3個(gè)月評估癌前病變，此時(shí)不需處死動(dòng)物。

A7，第一次注射后的6個(gè)月評估腫瘤發(fā)展。

方案B，慢性炎癥驅動(dòng)的腫瘤進(jìn)展（Chronic inflammation-driven tumor progression）

B1，制備2.5%（wt/v）DSS溶液。此濃度的DSS能讓FVB/N小鼠和其他品系產(chǎn)生良好的造模效果。

B2，按3天的用量加DSS溶液灌滿(mǎn)小鼠籠內的飲水槽，以5ml DSS溶液/小鼠/天用量，對照小鼠加等體積不含DSS的飲用水；

B3，第4天清空飲水槽內殘留DSS溶液，并且重新灌滿(mǎn)另2天所需量的新鮮DSS溶液。

B4，第6天清空飲水槽內殘留DSS溶液，并且重新灌滿(mǎn)另2天所需量的新鮮DSS溶液。

B5，第8天清空飲水槽內殘留DSS溶液，并且重新灌滿(mǎn)滅菌水。

B6，第22-29日重復步驟B1）-B5）。

B7，第40日評估癌前病變，此時(shí)不需處死動(dòng)物。

B8，第53-60日重復步驟B1）-B5）。

B9，第80日評估腫瘤發(fā)展。

2.4 AOM誘導腫瘤圖示（圖1）

圖1.內窺鏡腫瘤調研。通過(guò)迷你腔鏡監測AOM誘導的腫瘤形成情況。a）還能用于縱向研究；b）對于腫瘤負荷分析，每只小鼠的腫瘤大小按照預設的時(shí)間點(diǎn)記錄并做總和。

Azoxymethane（AOM）訂購信息：原裝正品，歡迎來(lái)電咨詢(xún)，021-54736159。

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

 — — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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