Calcein, AM 鈣黃綠素（綠色，活細胞熒光探針）

（標簽：超純HPLC≥97%，50μg單支銷售，普遍應用）

產品關鍵詞：

Calcein, AM, Ultra Pure Grade 鈣黃綠素（綠色）；活細胞探針；BCECF-AM；CFDA；碘化丙啶PI；細胞核探針；CAS：148504-34-1；

基本描述：

Calcein, AM，中文名鈣黃綠素乙酰甲酯，CAS NO：148504-34-1，一種具細胞膜滲透性的活細胞熒光染料，呈綠色熒光（Ex/Em= 490nm/515nm）。AM基團的存在不僅加強疏水性，使其能輕易穿透活細胞膜。而且封閉結合鈣離子的分子部分，本身不發熒光。一旦進入細胞后，被細胞內酯酶水解為鈣黃綠素（calcein），能與胞內鈣離子結合，產生強烈的綠色熒光。因不具有細胞膜滲透性，從而被保留在胞內。與其它活細胞染料（如BCECF-AM，CFDA）相比，Calcein, AM最適合用于活細胞染色探針，因細胞毒性很低，而且不會抑制任何細胞功能如增殖或淋巴細胞趨化性。另外，使用Calcein, AM活性檢測的實驗結果十分可信，與標準的51Cr釋放法所得結果一致。

最顯著特征：

只對活細胞進行染色，且細胞毒性極低，結果準確性高，是最適合的活細胞染色探針。

常與死細胞核探針碘化丙啶PI聯合標記，進行活細胞-死細胞的雙重染色實驗?！?/span>見下：活細胞-死細胞雙重染色步驟】

應用圖片：

文獻1：Yoshinori Hiraoka et al. Rapid Assessment of the Physiological Status of the Polychlorinated Biphenyl Degrader Comamonas testosteroni TK102 by Flow Cytometry. Appl Environ Microbiol. 2002 Apr; 68(4): 2031–2035.

圖1：睪丸酮叢毛單胞菌（C. testosteroni）菌株TK102經Calcein, AM，PI雙染后的熒光顯微檢測圖片。（A）活細胞，僅有綠色熒光；（B）死細胞，僅有紅色熒光；（C）透化處理細胞，中心是紅色熒光，外緣是綠色熒光。

文獻2：Mahto SK et al. Microfluidic shear stress-regulated surfactant secretion in alveolar epithelial type II cells in vitro. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2014 Apr 1;306(7):L672-83.

 圖2: effects of fluid shear stress on cell viability. MLE-12 (i) and A549 (ii) cells subjected to a maximal flow rate of 100 μl/min for 20 min were tested for viability using fluorescent dyes, calcein acetoxymethyl (AM) in green and propidium iodide in red (see arrows).

產品特性：

1）  CAS NO：148504-34-1

2）  同義名：鈣黃綠素乙酰甲酯；3'-O-乙酰胺-2',7'-二(羧乙基)-4或5-羧基熒光素，二乙酰甲酯；

3）  分子式：C46H46N2O23

4）  分子量：994.86

5）  純度：≥97%（HPLC）

6）  外觀：白色或淺黃色結晶粉末

7）  溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

8）  化學結構式：  

活細胞-死細胞雙重染色步驟：

1. 儲存液制備

1）Calcein, AM——若使用的工作液為2μM，那么可配制2mM的儲存液（1000×），即往50μg Calcein, AM（Mw：994.86）內加入25μl細胞培養級別的DMSO（貨號：MS4601-100mL）即可。-20℃干燥保存。

2）PI——用1ml去離子水溶解1mg PI，制備成1.5mM的儲存液（1mg/ml in H2O）。-20℃干燥保存。

2. 染色工作液制備

取5μlCalcein-AM溶液（2 mM）和15μlPI溶液（1.5 mM）加入5ml 1× PBS或HBSS-Hepes緩沖液，充分混勻。此時得到Calcein-AM的工作液濃度為2μM，PI的工作液濃度為4.5μM?！咀⒁狻浚河捎诓煌毎档淖罴讶旧珬l件不同，初次實驗建議做梯度實驗，以確定Calcein, AM的最佳工作濃度，以最低的探針濃度得到最好的熒光結果為篩選原則。

3. 染色步驟

1）對于貼壁細胞，先用胰酶-EDTA消化細胞，離心收集細胞（1000 rpm，3min）。對于懸浮細胞，直接離心收集細胞。

2）去上清，用PBS（或者其他緩沖液）清洗細胞2~3次，以充分去除殘留的酯酶活性。

3）用1× PBS或HBSS-Hepes緩沖液制備細胞懸液，使其密度為105~106細胞/ml。

4）取100μl染色工作液加入200μl細胞懸液內，混勻，37℃孵育15min?！咀⒁狻浚?/span>如果需要，可延長孵育時間至30min。

5）在蓋玻片上滴加適量染色后的細胞懸液。熒光顯微鏡下使用490±10 nm激發濾片同時檢測活細胞（黃綠色熒光）以及死細胞（紅色熒光）。另外，使用545nm的發射濾片僅能觀察到死細胞。也可以直接在熒光酶標儀下使用合適的濾片進行檢測。

【注意】：熒光顯微鏡下觀察時，如果背景高，可以用培養基清洗掉細胞外的染料后再觀察；Calcein-AM溶液和PI溶液可以混合在一起染色，也可以分開進行染色，加入的先后順序沒有影響。

【注意】：可以使用以下方法來優化得到兩種熒光染料的最佳工作濃度。

1）用0.1%皂素或者0.1-0.5%地高辛孵育細胞10min，或者用70%乙醇孵育細胞30min，從而制備死細胞；

2）用0.1-10μM的PI溶液進行死細胞染色，以得到僅僅對細胞核染色，而不會對細胞質染色的最佳工作濃度。

3）用0.1-10μM的Calcein-AM進行死細胞染色，以得到不會對細胞質染色的最佳工作濃度。然后用此濃度進行活細胞染色，去觀察是否活細胞能被染色。

產品訂購：更大包裝或產品技術問題，請來電/在線咨詢，電話：021-54736159。QQ：2971634497。

【好消息】：目前最高純度的鈣黃綠素乙酰甲酯（Calcein, AM，HPLC＞97%）限時促銷開始啦，本促銷最終解釋權歸上海懋康生物科技有限公司。本品長時間銷售供貨給國內各大科研機構，以質優價優獲得各老師的青睞。50μg單只特惠包裝，按照5μM的工作濃度，用于96孔板內活細胞檢測（工作體積100μl）可以做100個樣本。單個樣本檢測成本僅2元，非常劃算。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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