?? 載體：A23187 / 4-bromo-A23187 /Ionomycin

?? 探針：Fluo-3, AM/Fluo-4, AM/Rhod-2, AM/Rhod-4, AM（可見(jiàn)光激發(fā)）

?? 探針：Fura-2, AM/Indo-1, AM（紫外光UV激發(fā)）

?? 螯合劑：EGTA（金屬螯合劑）

搜索關(guān)鍵詞：Calcium Ionophore 鈣離子Ca2+載體；Calcium Indicators 鈣離子指示劑；Visible light-excitable 可見(jiàn)光激發(fā)；UV-excitable紫外光激發(fā)；Ionomycin離 子霉素；Fluo-3, AM CAS: 121714-22-5；Fura-2, AM CAS:108964-32-5;

背景描述：

鈣（Calcium）是一種重要的且普遍存在的第二信使，參與調控各種各樣的細胞過(guò)程，包括細胞增殖，基因轉錄，肌肉收縮和胞吞作用。響應于大量的刺激物，鈣離子（Ca2+）從胞內的儲存池釋放出來(lái)；而胞內Ca2+濃度的增加會(huì )引起細胞功能的活化、調節和終止。許多泵和離子通道都允許這種獨特的陽(yáng)離子進(jìn)入和離開(kāi)細胞，并且在細胞質(zhì)和胞內蓄池間移動(dòng)。

我司（懋康生物，MKbio）提供各種優(yōu)質(zhì)的指示劑/探針來(lái)檢測Ca2+釋放；Ca2+螯合劑和離子探針用做對照，以檢測鈣離子信號通路調控的酶活性。

? A1. 鈣離子載體（Ca²⁺ ionophores）基本介紹

1. A23187（CAS NO：52665-69-7），由于能夠非常明顯的提高二價(jià)陽(yáng)離子穿透生物膜，呈現出離子載體（ionophore）特性。A23187對Ca2+具有高度的選擇性，因此常用來(lái)增加完整細胞的胞內Ca2+水平，進(jìn)而研究胞內Ca2+介導的生理事件。含內源性的UV激發(fā)的自熒光，不能與UV激發(fā)的Ca2+指示劑聯(lián)合使用，比如：Fura-2。但仍可與長(cháng)波長(cháng)激發(fā)的鈣離子指示劑，如Fluo-2聯(lián)合使用。 

2. 4-Br- A23187（CAS NO：76455-82-8），高度選擇性的Ca2+載體，能夠提高胞內Ca2+水平。通常用做熒光探針確定胞內Ca2+水平的校準標準品（calibration standard），用來(lái)平衡胞內外的Ca2+水平，以及運載Mn2+進(jìn)入細胞以淬滅胞內探針的熒光。作為抗生素A23187的鹵化衍生物，基本沒(méi)有內源熒光，可與UV激發(fā)的Ca2+指示劑如Fura-2，Indo-1，Quin-2，以及可見(jiàn)光激發(fā)的指示劑如Fluo-4，Fluo-3，Rhod-2聯(lián)合使用。還能用來(lái)平衡胞內外Mg2+濃度，適合校準Mg2+指示劑。 

3. 離子霉素（Ionomycin，CAS：56092-81-0），一種有效的Ca2+載體，通常用來(lái)校準熒光Ca2+指示劑以及修飾胞內Ca2+濃度，以及用在對細胞過(guò)程中Ca2+的調控特性的研究中；

? A2. 鈣離子載體訂購信息：更大包裝或產(chǎn)品技術(shù)問(wèn)題，請來(lái)電/在線(xiàn)咨詢(xún)，電話(huà)：021-54736159 楊先生。

? B1. 可見(jiàn)光激發(fā)鈣離子指示劑（Visible-lightexcitable Ca²⁺ indicators）的優(yōu)勢

與紫外光激發(fā)的熒光探針相比，如Fura-2和Indo-1，可見(jiàn)光激發(fā)Ca2+探針具有以下特點(diǎn)：

1）適用于大多數的激光共聚焦鈣離子濃度檢測系統，包括共聚焦激發(fā)掃描顯微鏡以及流式細胞儀等。

2）具有更強的染料吸收性能，使得更低濃度的探針即可成功檢測Ca2+變化，從而降低了對活細胞的光毒性。

3）Ca2+依賴(lài)性熒光強度增強，對Ca2+變化水平檢測敏感度更高。

4）降低樣品自熒光以及光散射的干擾。

5）兼容光激活探針以及UV-激發(fā)試劑，因此更方便于多參數檢測。

6）無(wú)光譜偏移。

? B2. 常見(jiàn)的幾種可見(jiàn)光激發(fā)鈣離子指示劑基本介紹

1. Fluo-3, AM（CAS NO：121714-22-5），常用的可見(jiàn)光激發(fā)波長(cháng)Ca2+熒光探針，具有較高的Ca2+捕獲能力，通過(guò)熒光強度的變化直接反映Ca2+信號的動(dòng)力學(xué)變化。當Fluo-3以游離配體形式存在時(shí)幾乎是非熒光性的，但一旦與Ca2+結合即可產(chǎn)生很強的熒光，熒光信號增強60~80倍，此時(shí)的最大激發(fā)波長(cháng)為506nm，最大發(fā)射波長(cháng)為526nm?？赏ㄟ^(guò)激光共聚焦顯微鏡、流式細胞儀、熒光酶標儀等來(lái)檢測胞內鈣離子水平的變化。 

2. Fluo-4, AM（CAS NO：273221-67-3），Fluo-3的改良版本，通過(guò)將Fluo-3結構上的氯離子（Cl-）替換為電子吸引力更強的氟離子（F-），使得最大激發(fā)波長(cháng)往短波長(cháng)偏移10nm左右。正由于這個(gè)波長(cháng)更接近氬激光器的波長(cháng)，則當使用氬激光器來(lái)激發(fā)探針Fluo-4，能夠得到更強的熒光強度，比Fluo-3強一倍。另外，Fluo-4的Ca2+親和力幾乎接近Fluo-3（Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM），因此，使用上幾乎同Fluo-3。Ca2+結合后的最大激發(fā)波長(cháng)為494nm，最大發(fā)射波長(cháng)為516nm。 

3. Fluo-8, AM，目前最亮的可見(jiàn)光激發(fā)波長(cháng)Ca2+熒光探針，其熒光強度比Fluo-4強兩倍，比Fluo-3強四倍。 

4. Rhod-2, AM（CAS NO：129787-64-0），一種高親和力的可見(jiàn)光激發(fā)波長(cháng)Ca2+熒光探針。類(lèi)似于Fluo-3或Fluo-4，其激發(fā)和發(fā)射光譜不會(huì )隨著(zhù)Ca2+濃度變化發(fā)生明顯的遷移，熒光信號一旦與Ca2+結合后明顯增強。不同于Fluo-3或Fluo-4，Rhod-2的波長(cháng)更長(cháng)（Ex/Em=549/578 nm，Ca2+結合），這一特性使其更適合具高水平自熒光信號細胞或組織的Ca2+水平檢測，還可用來(lái)檢測由光感受器和籠鎖Ca2+螯合劑光激活導致的Ca2+釋放。

? B3. 可見(jiàn)光激發(fā)鈣離子訂購信息: 更大包裝或產(chǎn)品技術(shù)問(wèn)題，請來(lái)電/在線(xiàn)咨詢(xún)，電話(huà)：021-54736159 楊先生。

? C1. 紫外光激發(fā)鈣離子指示劑（UV-excitable C a²⁺ indicators）基本介紹

1. Fura-2, AM（CAS NO：108964-32-5），一種常用的紫外光激發(fā)和比率測定型Ca2+熒光探針。一旦與Ca2+結合后，Fura-2的最大激發(fā)波長(cháng)發(fā)生藍色遷移，由原來(lái)的363nm（Ca2+-free）遷移到335nm（Ca2+-saturated），而最大發(fā)射波長(cháng)基本未變化，保持在510nm左右。通常情況，分別用最大激發(fā)波長(cháng)340nm和380nm來(lái)激發(fā)Fura-2，且用340/380nm激發(fā)下的熒光比值來(lái)檢測細胞內Ca2+濃度。使用比值檢測，可消除不同細胞樣品間熒光探針裝載效率的差異，探針的滲漏，細胞厚度差異等因素導致的檢測誤差。 

2. Indo-1, AM（CAS NO：112926-02-0），一種常用的紫外光激發(fā)和比率測定型Ca2+熒光探針。一旦與Ca2+結合后，Indo-1的最大發(fā)射波長(cháng)向短波長(cháng)遷移，由原來(lái)的475nm（Ca2+-free）遷移到401nm（Ca2+-saturated），而最大激發(fā)波長(cháng)無(wú)明顯變化，維持在346nm~ 330nm范圍內，適宜用氬離子激發(fā)器的UV激發(fā)光譜（351~364nm）進(jìn)行熒光激活。因此，不同于Fura-2，Indo-1是發(fā)射波長(cháng)率圖Ca2+熒光探針，特別適合流式細胞儀檢測，因其可在控制單一激發(fā)波長(cháng)的條件下輕易調整發(fā)射濾片，也特別適合多色熒光檢測。使用發(fā)射波長(cháng)下熒光強度的比率來(lái)測定細胞內Ca2+濃度，可消除不同細胞樣品間熒光探針裝載效率的差異，探針的滲漏，細胞厚度差異等因素導致的檢測誤差。實(shí)際檢測，推薦使用最大發(fā)射波長(cháng)分別用405nm和485nm。

? C2. 紫外光激發(fā)鈣離子指示劑訂購信息: 更大包裝或產(chǎn)品技術(shù)問(wèn)題，請來(lái)電/在線(xiàn)咨詢(xún)，電話(huà)：021-54736159 楊先生。

? D1. 鈣離子螯合劑（EGTA）基本介紹

EGTA，英文名Ethylene Glycol Tetraacetic Acid，中文名乙二醇雙(2-氨基乙基醚)四乙酸，CAS：67-42-5，各種緩沖液中的一種重要化學(xué)試劑。最廣泛使用的一種鈣離子螯合劑，可在鎂離子Mg2+存在情況下，用來(lái)測定鈣離子，因鈣離子Ca2+-EGTA復合物的穩定性約比Mg2+-EGTA復合物強100,000倍?？捎脕?lái)制備鈣離子緩沖液和調控鈣離子濃度。

常在鈣離子載體如Ionomycin（離子霉素）存在的條件下，使用CaEDTA buffer原位校準細胞內鈣離子指示劑。

? D2. 鈣離子螯合劑（EGTA）產(chǎn)品訂購：更大包裝或產(chǎn)品技術(shù)問(wèn)題，請來(lái)電/在線(xiàn)咨詢(xún)，電話(huà)：021-54736159 楊先生。

注意事項

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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