Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit

抗酒石酸酸性磷酸酶染色試劑盒

產(chǎn)品信息

【重要提示】：為了保證試劑盒的工作性能，本試劑盒開(kāi)封后，于實(shí)驗前嚴格按照說(shuō)明書(shū)配制各底物反應液和反應工作液，配制的溶液請立即使用，當天一次用完。初次使用本試劑盒，先做2~3張片做預實(shí)驗，之后盡快完成批量實(shí)驗。

產(chǎn)品描述

酸性磷酸酶（Acid Phosphatase，ACP），是一類(lèi)磷酸酯酶，在酸性條件下可以催化磷酸酯鍵的水解。酸性磷酸酶是一個(gè)蛋白家族，哺乳動(dòng)物中分子量從18kD到100kD不等。ACP主要分為兩類(lèi)，一類(lèi)為抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate resistant acid phosphatase，TRAP），一類(lèi)為抗氟酸性磷酸酶（Fluoride resistant acid phosphatase，FRAR）。

TRAP是一種糖基化的含金屬蛋白酶，在破骨細胞（Osteoclast）和破軟骨細胞（Chondroclast）中高表達，在活化的巨噬細胞和神經(jīng)元中也有表達。存在于正常人肺泡巨噬細胞和白血病人脾臟的TRAP均在細胞濾泡中，并非釋放到血液中。血液中TRAP絕大部分來(lái)源于破骨細胞，因此，測量血液中TRAP可以了解破骨細胞的功能狀態(tài)。TRAP在細胞信號轉導、細胞增殖和分化等方面起重要作用，也和活性氧產(chǎn)生和鐵離子轉運等有關(guān)。

本抗酒石酸酸性磷酸酶染色試劑盒（Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit, TRAP Stain Kit）以萘酚AS-BI為底物，酸性pH下被ACP水解生成磷酸和萘酚，萘酚與重氮鹽偶聯(lián)生成有色產(chǎn)物，定位于細胞質(zhì)中。若細胞內ACP含抗酒石酸活性，則呈陽(yáng)性反應。本品可用于新鮮血涂片/骨髓涂片、細胞爬片、冰凍切片和石蠟切片中的破骨細胞染色。本試劑盒可染20~30張片。

產(chǎn)品組成

保存與運輸方法

保存：室溫密封保存，3個(gè)月有效。務(wù)必知悉：所有應用液配制后即可使用，務(wù)必當天用完。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1） TRAP染色液易失效，請務(wù)必現配現用。

2） GBC染色液請不要置于-20℃凍存，需2-8℃避光保存。

3） 樣本需新鮮，取材后請立即處理，否則會(huì )影響酶活性。

4） 對于冰凍切片染色，應盡量減少切片在室溫暴露的時(shí)間。

5） 對于血液涂片，推薦皮膚穿刺血涂片，晾干后及時(shí)染色

6） 本品不建議用于石蠟切片染色。

7） 組織固定需在4℃冰箱進(jìn)行，時(shí)間不要超過(guò)24h，否則酶活性會(huì )減弱或消失。

8） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

試劑準備

【務(wù)必知悉】：為了保證試劑盒的工作性能，本試劑盒開(kāi)封后，于實(shí)驗前嚴格按照說(shuō)明書(shū)配制各底物反應液和反應工作液，配制的溶液請立即使用，當天一次用完。初次使用本試劑盒，先做2~3張片做預實(shí)驗，之后盡快完成批量實(shí)驗。

1、底物反應液B1

1.1甲液配制：臨用前吸取甲粉溶解液（500μl）加入甲粉中，充分溶解，即得到甲液。

1.2乙液配制：臨用前吸取乙粉溶解液（500μl）加入乙粉中，充分溶解，即得到乙液。

1.3使用前，再將甲液和乙液混合，即得到底物反應液B1。

2、底物反應液B2

臨用前吸取丙粉溶解液（500μl）加入丙粉中，充分溶解，即得到底物反應液B2。

3、底物反應液B4

臨用前吸取丁粉溶解液（500μl）加入丁粉中，充分溶解，即得到底物反應液B4。

操作步驟

實(shí)驗前準備材料：蒸餾水，染缸，玻片，滴管，計時(shí)器，光學(xué)顯微鏡等

一、 樣本染色前處理

1.1 血液及骨髓涂片

j 推片：取新鮮血液或骨髓3μl左右置于載玻片上，推玻片與載玻片保持30°，置于血滴的正前方，稍往后移與血液接觸使后者沿推片下緣散開(kāi)，再勻速沿載玻片平面平穩向前方滑動(dòng)置鋪滿(mǎn)血膜為止。

k 自然晾干，再放入固定液中固定2~3min。

l 水洗約30~60s、稍微晾干（不易過(guò)分干燥）。

1.2 石蠟切片

j 二甲苯脫蠟5~10min，再換用新的二甲苯，重復一次。

k 無(wú)水乙醇5min，90%乙醇2min，70%乙醇2min，蒸餾水浸洗2min。

1.3 冰凍切片

j 回溫：將低溫保存的冰凍切片放置到切片架上于37℃回溫約5~10min。

k 水合：將回溫好的切片在水中浸泡1~2min。

l 固定：固定液固定5~10min。

m 水洗約30~60s、稍微晾干（不易過(guò)分干燥）。

二、 染色流程（染色缸孵育法）

2.1往染缸內加入30ml蒸餾水，37℃水浴10min。

2.2將現準備的底物反應液B1、B2、B3、B4依次加入預溫的蒸餾水中?；靹蚣吹玫剑悍磻ぷ饕?。

2.3將已固定、水洗且未完全干的玻片，立即放入反應工作液中，避光孵育60min。

2.4孵育完后，取出水洗1min，在玻片未完全干之前進(jìn)行復染。用蘇木素染色液復染1~2min或甲基綠染色液復染2~3min。（此處復染液二選一即可）

2.5孵育完后，取出水洗10s，在玻片未完全干之前，即可用光學(xué)顯微鏡觀(guān)察或水溶性封固劑封片后待檢。

三、染色結果

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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