EDC HCl 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽

點擊丨商城購買 積分領好禮

產品關鍵詞

EDC 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺；EDC HCl；sulfo-NHS N-羥基硫代琥珀酰亞胺；Carboxyl activating agent 羧基活化劑；Peptide synthesis 多肽合成；CAS：25952-53-8；

產品信息

產品描述

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride, EDC HCl）是一種水溶性碳二亞胺衍生物，用于偶聯半抗原到蛋白和多肽上。EDC HCl能用來修飾NMDA受體，以及肽合成中用作一種縮合劑。

EDC HCl是一種零長度交聯劑，用來偶聯羧基到伯胺上。這一交聯劑應用非常廣泛，比如：肽合成中形成酰胺鍵，連接半抗原到載體蛋白上形成免疫原，通過5'磷酸基團標記核酸，制備生物分子具胺反應指向的N-羥基琥珀酰亞胺酯（NHS Ester）。

EDC首先與羧基反應產生一個具胺反應性的O-?；愲逯虚g體，如果這一中間體未碰到胺，會水解再生成羧基。當體系內含N-羥基硫代琥珀酰亞胺（sulfo-NHS），EDC能將羧基轉化成具胺反應性的N-羥基硫代琥珀酰亞胺酯（sulfo-NHS ester）。這一步只需將EDC與含羧基分子混合，并加入sulfo-NHS即可完成。

產品特性

1）   CAS NO：25952-53-8

2）   英文同義名：EDC Hydrochloride; EDAC HCl; EDAC Hydrochloride; WSC HCl; N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride; 3-(ethyliminomethylideneamino)-N,N- dimethylpropan-1-amine hydrochloride; 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride;

3）   中文同義名：EDC鹽酸鹽；EDAC 鹽酸鹽；WSC 鹽酸鹽；1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽；N-乙基-N′-(3-二甲基氨丙基)碳二亞胺鹽酸鹽；

4）   分子式：C8H17N3·HCl

5）   分子量：191.7 g/mol

6）   純度：≥98%

7）   外觀：白色至灰白色粉末

8）   溶解性：溶于水

9）   化學結構式：

保存與運輸方法

保存：-20℃干燥保存，至少2年有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

操作步驟【僅做參考】

一、  用EDC將半抗原偶聯到載體蛋白上

1.1   所需材料

載體蛋白：2mg 牛血清白蛋白（BSA）、卵清白蛋白（OVA）或鑰孔血藍蛋白（KLH）

共軛緩沖液：0.1M MES，pH 4.5~5

EDC：10mg

半抗原：1~2mg

離心脫鹽柱或其他具5~6k截留分子量的凝膠過濾柱

1.2   偶聯步驟

1）   將EDC平衡至室溫；

2）   加入2mg BSA、OVA或KLH到200μl共軛緩沖液；

3）   在500μl共軛緩沖液中溶解高達2mg的肽或半抗原，并將其加入200μl載體蛋白溶液中。

4）   對于BSA或OVA偶聯，將10mg EDC溶于1ml超純水中，并且立即加100μl該溶液到載體蛋白-多肽溶液。對于KLH偶聯，將10mg EDC溶于1ml超純水中，并且立即加50μl該溶液到載體蛋白-多肽溶液。如果出現沉淀，之后減少EDC用量。

5）   室溫反應2h。

6）   使用脫鹽柱純化偶聯物。如果需將免疫原儲存數日，需過濾除菌，并在4℃或-20℃下保存于無菌管內。

二、  用EDC和NHS（或Sulfo-NHS）兩步法偶聯蛋白

【注意】以下步驟引用自Grabarek and Gergely，能夠順序偶聯兩個蛋白，并且不會影響第二個蛋白的羧基。此步驟需含巰基化合物淬滅第一個反應。

【注意】EDC與Sulfo-NHS的活化反應在pH 4.5~7.2最有效。然而，NHS活化或Sulfo-NHS活化分子與伯胺的反應在pH 7~8最有效。為了得到最佳結果，第一步反應在pH 5~6的MES緩沖液（或其他非胺非羧酸鹽緩沖液）內進行，之后用磷酸鹽緩沖液（或其他非胺緩沖液）提高pH到7.2~7.5，立即進行與伯胺分子的反應。為了淬滅第一步反應，使用2-ME或通過脫鹽柱進行緩沖液交換，可以簡單的除去過量試劑。

2.1   所需材料

活化緩沖液：0.1M MES，0.5M NaCl，pH 6.0

偶聯緩沖液：磷酸鹽（PBS），100mM 磷酸鈉，150mM NaCl，pH 7.2

蛋白1：制備于活化緩沖液（1mg/ml）

蛋白2：制備于偶聯緩沖液

NHS或Sulfo-NHS

2-ME

【可選】脫鹽柱或其他凝膠柱

羥胺鹽酸

2.2   偶聯步驟

1）   開瓶前將EDC和NHS平衡至室溫。

2）   向1 ml蛋白1溶液中加入0.4 mg EDC（~2 mM）和0.6 mg NHS或1.1 mg Sulfo-NHS（~5 mM），室溫下反應15min。

3）   加入1.4 μl 2-ME（終濃度為20 mM）以淬滅EDC。

4）   【可選】：使用已經用偶聯緩沖液（PBS）平衡的脫鹽柱將蛋白質與過量的還原劑和滅活的交聯劑分開。

5）   將蛋白2以與蛋白質1等摩爾比加入活化的蛋白中。室溫反應2h。

6）   為了淬滅反應，加入羥胺至終濃度為10 mM。此方法水解蛋白1上未反應的NHS，生成異羥肟酸。

7）   使用脫鹽柱除去過量的淬滅劑。

相關產品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。