10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP) 過氧化氫探針

（Amplex^® Red H₂O₂ probe 過氧化氫探針）

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搜索關鍵詞：

10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)；Amplex®Red； Resorufin 試鹵靈；過氧化氫探針；Ampliflu? Red；CAS NO：119171-73-2；

基本介紹：

10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)，中文名10-乙?；?3,7-二羥基吩嗪，以商標名Amplex®Red在市場上銷售。ADHP是一種高度靈敏和穩定的過氧化物酶底物，選擇性檢測過氧化氫（H2O2）。存在辣根過氧化物酶（HRP）的體系中，這一基本無色和非熒光的ADHP與H2O2以1：1的化學定量比反應，生成強紅色熒光的試鹵靈（Resorufin）（Ex/Em= 571/585nm），可通過熒光光度計和酶標儀分析結果。許多酶反應能產生H2O2，因此，ADHP能夠用在偶聯酶促反應中檢測許多不同酶的生物活性。

工作原理：

Fig 1. 使用ADHP進行偶聯酶促反應的工作原理。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成過氧化氫（H2O2），通過辣根過氧化物酶（HRP）催化ADHP反應生成強熒光試鹵靈（Resorufin）。

產品應用：

10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)是目前位置最靈敏和穩定的熒光探針用來檢測HRP和H2O2。

A）  ADHP普遍用來檢測許多免疫實驗中的HRP；

B）  ADHP用來檢測微量的H2O2；

Zhou, M.等研究表明ADHP（Amplex®Red）檢測過氧化物酶活性，最少能檢測1×10?5U/mL HRP；或H2O2，最少能檢測50nM H2O2?！疚墨I來源：Zhou M et al. A stable nonfluorescent derivative of resorufin for the fluorometric determination of trace hydrogen peroxide: applications in detecting the activity of phagocyte NADPH oxidase and other oxidases. Anal Biochem. 1997 Nov 15;253(2):162-8.】

基本特性：

1）   CAS NO.：119171-73-2

2）   化學名：1-(3,7-dihydroxy-10H-phenoxazin-10-yl)-ethanone; 10H-Phenoxazine-3,7-diol, 10-acetyl-;

3）   同義名：N-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine N-乙?；?3,7-二羥基吩嗪；ADHP；Amplex®Red Reagent；A 6550；Ampliflu? Red 熒光紅染料；

4）   分子式：C14H11NO4

5）   分子量：257.25

6）   純度：≥98%

7）   摩爾消光系數（ε）：54,000 (Resorufin)

8）   Ex/Em：571/585nm (pH 9.0, Resorufin)

9）   溶解性：溶于DMSO、DMF

10）  化學結構式： 

ADHP的應用實例：

文獻來源：Summers FA et al. Photooxidation of Amplex Red to resorufin: implications of exposing the Amplex Red assay to light. Methods Enzymol. 2013;526:1-17.

實驗1）Amplex Red Assay

Reactions containing 50 μM Amplex Red reagent, 0.1 U/mL HRP, H2O2 and 0.5 U/mL catalase in 50 mM sodium phosphate buffer, pH 7.4, as indicated in the figure legends, were prepared in a darkroom under a red light. White ELISA plates containing the samples (100 μL/well) in triplicate were either kept in the dark for 30 and 60 min or under ambient laboratory light. The fluorescence (excitation 535 nm, emission 595 nm) was measured on a GENios platereader (Tecan, Durham, NC, USA).

實驗2）Cell Culture Assay

HaCaT keratinocytes were incubated with 50 μM Amplex Red in PBS for 1 h at 37°C in the dark, then cells were irradiated using UVA (315–400 nm) from four fluorescent PUVA lamps (Houvalite F20T12BL-HO; National Biological Co., Twinsburg, OH) for 15 minutes (3.75 J/cm2) and 30 minutes (7.5 J/cm2). Control cells were treated with the same conditions. After exposure, the fluorescence (excitation 535 nm, emission 595 nm) was recorded using a plate reader.

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注意事項

1）   ADHP的使用比較方便，可配制10-20mM DMSO儲存液，之后用反應緩沖液比如PBS，Tris buffer稀釋到50-200μM工作濃度用于檢測。最佳的工作濃度需根據自身實驗需求進行優化。

2）   Amplex®Red是Life Technologies公司的注冊商標名。

3）   為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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