Rhodamine Phalloidin羅丹明標記鬼筆環(huán)肽

(Cytoskeleton Inc. PHDR1）

產(chǎn)品標簽

Phalloidin 鬼筆環(huán)肽；Actin-Stain^TM 488 Phalloidin；F-actin 肌動(dòng)蛋白（聚合）；Actin filaments 肌動(dòng)蛋白絲；Cytochalasin細胞松弛素；CAS NO.：17466-45-4；

基本描述

鬼筆環(huán)肽（Phalloidin），又稱(chēng)鬼筆鵝膏素，是從毒蘑菇鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）中分離到的一種七氨基酸多肽毒素，以極高親和力和特異性結合肌動(dòng)蛋白絲F-actin（聚合形式的肌動(dòng)蛋白）（Kd=20nM）。鬼筆環(huán)肽將肌動(dòng)蛋白聚合的臨界濃度降至≤1μg/ml，從而用作一種聚合增強劑。熒光探針標記的鬼筆環(huán)肽（Fluorescent-conjugated Phalloidins）能對組織培養細胞、組織切片和無(wú)細胞制備物進(jìn)行肌動(dòng)纖維絲染色。經(jīng)鬼筆環(huán)肽標記的肌動(dòng)纖維絲仍能維持標記前的許多功能特征包括能夠與肌球蛋白相互作用。

產(chǎn)品應用

1. [Stain F-actin in fixed cells]; 對固定的組織切片和組織細胞培養物進(jìn)行聚合形式肌動(dòng)蛋白的熒光染色；

2. [Stabilize actin filaments in vitro] 體外穩定肌動(dòng)蛋白絲；

3. [Visualize actin filaments in vitro] 體外可視化肌動(dòng)蛋白絲；

鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）用作實(shí)驗室研究工具的方法得到良好的闡述和驗證，歸功于其能抑制微絲去聚合（Microfilament depolymerization）的能力。由此，經(jīng)Phalloidin穩定的微絲能用作底物來(lái)鑒定和歸類(lèi)逐漸增加的微絲相關(guān)蛋白。另外，羅丹明標記的鬼筆環(huán)肽（Rhodamine Phalloidin）能用來(lái)對細胞肌動(dòng)蛋白骨架進(jìn)行染色，以及細胞運動(dòng)實(shí)驗中用作微絲的熒光標志物/穩定劑。

產(chǎn)品特征

1. 外觀(guān)：粉末凍干粉；

2. 純度：>99%

3. 分子量：1306

4. 保存：凍干粉4℃干燥保存1年有效；儲存液-20℃避光保存半年有效；

5. 重溶方法：使用前簡(jiǎn)單離心使得產(chǎn)品都降至管底，加入500μl 100%甲醇充分溶解后配置成14μM儲存液。建議按照10×50μl分裝，-20℃避光保存，穩定保存6個(gè)月。

6. 生物活性：本品的肌動(dòng)蛋白絲穩定活性（Microfilament stabilizing property）相當于或更優(yōu)于其他商業(yè)化同類(lèi)型鬼筆環(huán)肽產(chǎn)品。用70nM Phalloidin標記的肌動(dòng)蛋白絲室溫超過(guò)1周穩定保存。

應用實(shí)例

Fig 1.  羅丹明鬼筆環(huán)肽（Cytoskeleton, PHDR1）染色下的Swiss 3T3成纖維細胞。A Swiss 3T3 fibroblast stained with rhodamine phalloidin (PHDR1). The phalloidin binds specifically to F-actin and does therefore stain the actin stress fibers in the cell

使用方法【僅作參考】：

1. 免疫熒光（Immunofluorescence）

需要材料：1）Rhodamine Phalloidin（PHDR1）；2）蓋玻片爬片生長(cháng)達到半匯合的Swiss 3T3細胞；3）PBS buffer；4）固定劑；5）破膜劑；7）抗熒光淬滅封片劑；8）100nM DAPI in PBS；11）載玻片；12）蓋玻片封固液（透明指甲油）；

操作流程：咨詢(xún)我司工作人員或詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)。

2. 制備穩定的熒光標記肌動(dòng)蛋白絲（Preparation of stabilized fluorescent actin filaments）

體外肌動(dòng)蛋白運動(dòng)試驗（in vitro motility assays），穩定的熒光標記肌動(dòng)蛋白絲是研究肌球馬達蛋白非常優(yōu)秀的底物材料。Rhodamine phalloidin結合對肌球蛋白ATPase的肌動(dòng)蛋白激活無(wú)影響。

需要材料：1）肌動(dòng)蛋白Actin protein（#AKL99-A）；2）通用肌動(dòng)蛋白緩沖液General Actin buffer（#BSA01）；3）10×聚合緩沖液Polymerization buffer（#BSA02）；4）Rhodamine phalloidin（PHDR1）；

操作流程：

 1. 用250ul 添加0.2mMATP和1.0mM DTT的通用肌動(dòng)蛋白緩沖液來(lái)重懸兔肌肉肌動(dòng)蛋白（rabbit muscle actin，#AKL99-A），使其濃度為1mg/ml。

2. 加入1/10體積的聚合緩沖液來(lái)聚合肌動(dòng)蛋白，室溫孵育1h。

3. 用含70nM rhodamine phalloidin的聚合緩沖液按照1:100的比例稀釋聚合的肌動(dòng)蛋白絲。

4. 吸取1ul標記好的肌動(dòng)蛋白滴在已滴有一滴抗熒光淬滅劑的載玻片上。

5. 取一干凈蓋玻片蓋在液滴處，用紙巾吸掉多余液體。

6. 熒光顯微鏡觀(guān)察熒光纖維。肌動(dòng)蛋白絲平均長(cháng)度為5-40um，在4℃避光能穩定保存1周。

產(chǎn)品訂購：美國Cytoskeleton原裝正品現貨供應，歡迎來(lái)電咨詢(xún)，電話(huà)021-54736159，QQ：2971634497。

【說(shuō)明A】：本品500ul約可做300-350張細胞爬片；

【說(shuō)明B】：若想保持優(yōu)異的染色結果，又受成本所限制，強力推薦使用我司MKbio的同類(lèi)型產(chǎn)品TRITC-Phalloidin（# MX4405-300T），絕對進(jìn)口品牌，經(jīng)實(shí)驗室和客戶(hù)的雙重驗證，染色優(yōu)異，價(jià)格實(shí)惠，僅568元/300T，歡迎咨詢(xún)和訂購。電話(huà)：021-54736159，QQ：2971634497。

【提示A】：見(jiàn)我司整理的MKbio鬼筆環(huán)肽及衍生物（Phalloidin and Phalloidin Conjugates）產(chǎn)品專(zhuān)題。

【提示B】：見(jiàn)我司整理的Cytoskeleton 鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）產(chǎn)品專(zhuān)題。

相關(guān)產(chǎn)品：美國Cytoskeleton原裝正品部分現貨供應，歡迎來(lái)電咨詢(xún)，電話(huà)021-54736159，QQ：2971634497。

引用文獻（#PHDR1）：

Lee et al., 2013. Phellinus baumii extract influences pathogenesis of Brucella abortus in phagocyte by disrupting the phagocytic and intracellular trafficking pathway. J. Appl. Microbiol. 114, 329–338.

Baruzzi and Berton, 2012. The tyrosine kinase Abl is a component of macrophage podosomes and is required for podosome formation and function. E. J. Immunol. doi: 10.1002/eji.201142270.

Shiozaki et al., 2012. XB130 as an Independent Prognostic Factor in Human Esophageal Squamous Cell Carcinoma. Ann. Surg. Oncology. doi: 10.1245/s10434-012-2474-4.

Gallo et al., 2012. Regulation of the Actin Cytoskeleton by Rho Kinase Controls Antigen Presentation by CD1d. J. Immunol. doi: 10.4049/jimmunol.1101484.

Lee et al., 2012. Dysadherin expression promotes the motility and survival of human breast cancer cells by AKT activation. Cancer Sci. v 103, pp 1280-1289.

Shi et al., 2012. MTA-enriched nanocomposite TiO2-polymeric powder coatings support human mesenchymal cell attachment and growth. Biomed. Mater. 7:055006. doi:10.1088/1748-6041/7/5/055006.

Ezratty et al., 2005. Microtubule-induced focal adhesion disassembly is mediated by dynamin and focal adhesion kinase. Nat. Cell Biol. v 7, pp 581-590.
Gomes et al., 2005. Nuclear movement regulated by Cdc42, MRCK, myosin, and actin flow establishes MTOC polarization in migrating cells. Cell. v 121, pp 451-463.
Chandhoke et al., 2004. β3 integrin phosphorylation is essential for Arp3 organization into leukocyte αVβ3-vitronectin adhesion contacts. J. Cell Sci. v 117, pp 1431-1441.
Hsieh-Wilson et al., 2003. Phosphorylation of spinophilin modulates its interaction with actin filaments. J. Biol. Chem. v 278, pp 1186-1194.
Qian et al., 2002. PKC phosphorylation increases the ability of AFAP-110 to cross-link actin filaments. Mol. Biol. Cell. v 13, pp 2311-2322.
Chen, J., Fabry, B., Schiffrin, E. L. and Wang, N. (2001). Twisting integrin receptors increases endothelin-1 gene expression in endothelial cells. Am. J. Physiol. Cell Physiol. v 280, pp C1475-C1484.

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗室消耗品與實(shí)驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營(yíng)理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。