5-Fluoroorotic Acid (5-FOA) 5-氟乳清酸

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5-FOA 5-氟乳清酸；URA3基因；Orotine-5'-monophosphate (OMP) decarboxylase；Counter-selection agent反選劑；CAS：703-95-7；

產品描述：

5-氟乳清酸（5-Fluoroorotic Acid，5-FOA）用于酵母反選是一種常用的分子遺傳篩選方法。酵母菌質粒清除、質粒穿梭、等位置換和雙雜交篩選都會用到5-FOA。5-FOA自身對酵母細胞無毒，但功能型URA3基因能編碼表達乳清酸核苷-5′-單磷酸脫羧酶（OMP脫羧酶），將其轉化為有毒形式（如5-氟尿嘧啶），從而使得酵母細胞無法生長。因此，在添加尿嘧啶的5-FOA培養基中，攜帶URA3突變基因的酵母菌能正常生長。5-FOA主要用于釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae（URA3）的鑒定和篩選，雖然曾用于其他菌株，包括粟酒裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe（URA4 and URA5），白色念珠菌Candida albicans（URA3）和大腸桿菌E. coli（pyrF）。酵母雙雜交系統中5-FOA的使用允許構建激活結構域雜交文庫來鑒定蛋白-蛋白相互作用。

產品應用：

1. 檢測酵母URA3基因表達；

2. 構建酵母雙雜交文庫；

3. 其他酵母遺傳學領域包括基因替換，可移動遺傳因子分析和基因突變鑒定研究。

重要參數

1） CAS NO：703-95-7, 220141-70-8, 207291-81-4

2） 同義名：5-fluoro-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahydropyrimidine-4-carboxylic acid; 5-Fluorouracil-4-carboxylic acid; 5-Fluoro orotic acid; 2,6-Dihydroxy-5-fluoropyrimidine-4-carboxylic acid;

3） 純度：≥98%

4）外觀：類白色至淡黃色粉末

5）熔點：~258°C（高溫非常穩定，如煮沸和高壓滅菌）

6）溶解性：溶于DMSO，微溶于水，乙醇，甲醇

使用方法

一、5-FOA培養基配置方法（以粉末形式）

1.1 配制400ml標準的酵母合成培養基，并加入1g 5-FOA（#MF2521）粉末，充分溶解混勻，0.22μm濾膜過濾除菌?！净蛘呖僧敻邏簻缇臉藴逝囵B基冷卻到55oC后再加入1g 5-FOA粉末，然后過濾除菌?！?/span>

1.2 高壓滅菌瓊脂粉/水混合液（濃度為20g/600ml），使其冷卻到55oC。

1.3 將溫熱的5-FOA培養液倒入瓊脂粉/水溶液內，攪勻后，倒平板。

二、5-FOA培養基配置方法（以儲存液形式）

2.1 取100mg 5-FOA凍干粉，用1ml無水DMSO充分溶解，配制成100mg/ml（100×）的儲存液。短期頻繁使用，置于4oC避光保存；長期保存，根據單次用量分裝凍存，-20oC保存6個月有效。

2.2 根據實驗室認可的方法，配制標準的酵母合成培養基（含瓊脂粉），高壓滅菌。放入轉子一起滅菌以便后續攪勻組分用。

2.3 冷卻到55oC后加入任何熱敏感組分（氨基酸，糖類或者其他成分）。

2.4 每升培養基加10ml100×5-FOA儲存液，混勻后，倒平板。

常見問題（FAQs）：

Q1. 如何保存5-FOA？

A1. 5-FOA粉末可置于4°C短期保存，-20°C長期保存。根據產品特性溶解配置儲存液，需避光置于4°C短期保存。小量分裝后-20°C長期保存，可穩定保存6個月。

Q2. 5-FOA選擇性培養基pH是多少？

A2.大于pH 4.5條件下5-FOA選擇性被破壞，唯一的問題在于質子化形式的FOA會滲透進入細胞。一般情況標準配方配置的平板pH=2.8。在pH=6或6.2時5-FOA完全無活性，pH =5.4時5-FOA活性很好，pH=4或更低時5-FOA活性達到100%。正常情況配置5-FOA培養基不用調pH。

Q3.預制的5-FOA選擇性平板能保存多久？

A3.絕大多數實驗室保存5-FOA預制平板數月（3-6個月）。有的實驗室數據顯示能放9個月和＞12個月（4°C存放），圈上封口膜防止干燥。

Q4. 5-FOA使用濃度？

A4. FOA（1mg/ml）在酵母分子遺傳學中常用作選擇性試劑；在Ura+細胞群體重篩選出Ura-細胞；篩選釀酒酵母菌乳清酸核苷-5′-單磷酸脫羧酶（OMP脫羧酶）突變株。FOA（0.1mg/ml）用來正篩選尿嘧啶營養缺陷型的硫依賴型嗜熱古細菌（Sulfolobus acidocaldarius）。

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