Enhanced Potassium Green-2 AM 鉀離子指示探針

【務(wù)必注意】：初次使用離子探針的用戶(hù)，強烈建議配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細胞培養級（MS4301-1G）一起使用，以提高探針的水溶性和胞內加載性。 

產(chǎn)品標簽

Enhanced Potassium Green-2 AM（EPG-2 AM） K+indicator；PBFI AM 鉀離子指示劑/探，SBFI AM 鈉離子指示劑/探針，Asante Potassium Green-2，Valinomycin 纈氨霉素

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

Enhanced Potassium Green-2 AM（EPG-2 AM）是Asante Potassium Green-2 AM（APG-2 AM）的替代物，

是一種具細胞膜滲透性的新型K+熒光探針，具有容易加載、緩慢泄露、良好光穩定性和寬動(dòng)力學(xué)范圍等理想特征，正好彌補傳統K+熒光探針PBFI AM（#MX4510）的缺陷。EPG-2 AM被可見(jiàn)光激發(fā)，最佳激發(fā)波長(cháng)為517nm，但也能被傳統波長(cháng)488nm激發(fā)檢測。雖然不是比率型探針，但其寬廣的動(dòng)力學(xué)范圍使其甚至能檢測到變化很小的K+濃度。EPG-2 AM用近紅外波長(cháng)的雙光子激發(fā)下信號很強且抗熒光淬滅很好。也適用于共聚焦顯微鏡、流式細胞儀和高通量篩選分析。

保存與運輸方法

保存：-20oC避光干燥保存，1年有效。

運輸：冰袋運輸。

產(chǎn)品特性

1）   分子式：C55H64Cl2N2O19

2）   分子量：1128.02 g/mol

3）   純度：＞ 80%（HPLC）

4）   最大激發(fā)波長(cháng)：526 ± 3 nm（in methanol）

5）   最大發(fā)射波長(cháng)：546 ± 3 nm（in methanol）

6）   解離常數（Kd）：18mM

7）   動(dòng)力學(xué)范圍（Fmax/Fmin）：12

8）   溶解性：溶于DMSO

9）   化學(xué)結構式：

常用操作流程（AM熒光探針）

以下步驟僅做參考，具體請根據實(shí)際情況或參考文獻資料來(lái)調整。

1.1    使用無(wú)水DMSO溶解EPG-2 AM（Mw：1128.02 g/mol）配制成1-5mM儲存液，比如往50μg EPG-2 AM凍干粉內加入22μl DMSO，充分溶解后配制成2mM儲存液。-20oC分裝干燥凍存，避免反復凍融。

1.2    通常在含適當濃度AM探針的無(wú)血清培養基中實(shí)現探針加載。建議正式實(shí)驗前向加載培養基內加入Pluronic F-127以促進(jìn)AM探針的分散?？捎肈MSO配置20% Pluronic F-127儲存液或其他濃度，只需在正式實(shí)驗前將其與EPG-2 AM儲存液混合，然后加入加載培養基，保證其終濃度＜0.1%（w/v）。

1.3    室溫或37℃孵育細胞（可能在室溫的探針加載質(zhì)量會(huì )高些），孵育濃度通常為1-10μM，孵育時(shí)間通常為30-60min，具體的請根據實(shí)際情況或參考文獻資料。

1.4    【可選】對于大分子量AM探針（分子量≥1000g/mol），孵育結束，加入不含AM探針的細胞加載培養基額外孵育20-60min，以確保細胞將AM基團完全去酯化。

1.5    用不含血清和探針的培養基清洗細胞至少一次，以降低細胞外背景熒光。

1.6    最后用合適的儀器來(lái)檢測熒光信號。檢測用最大激發(fā)波長(cháng)517nm，最大發(fā)射波長(cháng)540nm。

【注意】：

a)      如果細胞加載培養基是以碳酸氫鈉為緩沖體系，那么加載需要含5% CO2的環(huán)境內進(jìn)行，以防止因CO2損失引起的培養基堿化。

b)      如果細胞加載培養基含血清，那需適當提高AM探針工作濃度，以補償因AM探針與血清蛋白結合引起的損失。

c)      某些情況下，對分子量接近或超過(guò)1000的AM探針，需用不含AM探針的細胞加載緩沖液進(jìn)一步孵育20-60min，以保證細胞內酯酶能充分降解AM基團。

d)      探針的加載時(shí)間和濃度因具體的細胞類(lèi)型而有差異，請根據具體的細胞類(lèi)型來(lái)優(yōu)化。

e)      對每一種探針有必要通過(guò)校準（calibration）來(lái)得到實(shí)際解離常數（Kd）。物理條件如溫度，pH，離子強度或溶液粘度，以及探針與細胞組成成分如蛋白質(zhì)的相互作用，都會(huì )影響Kd值。實(shí)際情況細胞內的Kd比體外溶液通常要高。因此，細胞水平研究有必要進(jìn)行校準確認實(shí)際Kd值。

f)       對于EPG-2，雖然最大激發(fā)波長(cháng)在517m，但其極強的熒光亮度使其能夠用標準的488nm濾片來(lái)激發(fā)，與Fluo系列的可見(jiàn)光鈣離子指示探針檢測手段一致。值得注意的是，488nm激發(fā)下得到的熒光強度約為最大激發(fā)波長(cháng)下的40%。

注意事項

1）   EPG-2 AM易受潮，粉末需干燥保存；粉末需用無(wú)水DMSO溶解，配制儲存液（如10mM），置于-20℃干燥避光保存，小量分裝避免反復凍融，至少3個(gè)月穩定。

2）   為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗室消耗品與實(shí)驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營(yíng)理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

引用文獻：

 [1]Zhang P, Qiu Y, Wang Y, Xiao L, Yu S, Shi M, Ni Y, Miron RJ, Pu Y, Zhang Y. Nanoparticles Promote Bacterial Antibiotic Tolerance via Inducing Hyperosmotic Stress Response. Small. 2022 May;18(19):e2105525. doi: 10.1002/smll.202105525. Epub 2022 Apr 10. PMID: 35398987.

E. coli and S. aureus were stained with 2 μm EPG-2 (Shanghai Maokang Biotechnology Co., MX4513)

[2] Zhou Y, Chen Y, Zhong X, Xia H, Zhao M, Zhao M, Xu L, Guo X and You C-G (2022) Lipoxin A4 attenuates MSU-crystal-induced NLRP3 inflammasome activation through suppressing Nrf2 thereby increasing TXNRD2. Front. Immunol. 13:1060441. doi: 10.3389/fimmu.2022.1060441

Intracellular potassium ions were detected by EPG-2 AM (MX4513; Maokang Biotechnology, Shanghai, China), a fluorescence indicator for potassium ions.

[3] Chai Q, Yu S, Zhong Y, Lu Z, Qiu C, Yu Y, Zhang X, Zhang Y, Lei Z, Qiang L, Li BX, Pang Y, Qiu XB, Wang J, Liu CH. A bacterial phospholipid phosphatase inhibits host pyroptosis by hijacking ubiquitin. Science. 2022 Oct 14;378(6616):eabq0132. doi: 10.1126/science.abq0132. Epub 2022 Oct 14. PMID: 36227980.

At 48 hours after infection, medium was replaced with FBS-free DMEM containing 10 μM of Enhanced Potassium Green-2 (EPG-2) AM (Shanghai Maokang Biotechnology),