TMB One Solution (HRP-based ELISA)

單組分TMB顯色液（ELISA，HRP顯色用）

產(chǎn)品標簽

TMB One Solution 單組份TMB溶液；ELISA；HRP (Horseradish Peroxidas) 辣根過(guò)氧化物酶；DAB；CAS NO:64285-73-0；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

酶聯(lián)免疫分析技術(shù)（ELISA）廣泛用于抗原、半抗原或抗體的定量或定性分析，辣根過(guò)氧化物酶（HRP）及其偶聯(lián)物是ELISA技術(shù)常用的一種酶，能催化底物如3,3'5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）發(fā)生顯色反應，從而進(jìn)行定量或定性分析。由于TMB比其他顯色底物具更高的靈敏度且無(wú)致癌性被廣泛使用，TMB主要用于ELISA，免疫斑點(diǎn)雜交或免疫組化等實(shí)驗，也有報道將其用于氯的檢測分析。

通常TMB顯色試劑由多個(gè)組分構成，必須在使用前進(jìn)行配制，并且容易產(chǎn)生沉淀，使用相對不便且容易導致檢測結果不穩定。本品采用全新的TMB顯色技術(shù)，將所有相關(guān)試劑全部配在一個(gè)溶液，即僅由單一溶液組成，不僅簡(jiǎn)化了操作步驟，而且使檢測結果更加穩定可靠。

本品專(zhuān)門(mén)為ELISA實(shí)驗而設計。檢測原理在于HRP或其他適當過(guò)氧化物酶能催化生成可溶的藍色產(chǎn)物，此時(shí)通?？稍?70nm測定吸光度。當顯色反應被酸性溶液（如0.5-2M H2SO4，0.5M HCl，1M H3PO4）終止后，產(chǎn)物由藍色轉為黃色，此時(shí)可在450nm測定吸光度。由于本品顯色敏感度高，線(xiàn)性濃度范圍較寬，極其適合用于定量ELISA分析。

本品用于ELISA檢測，每個(gè)樣品通常使用0.1ml顯色液，則100ml本品約檢測1000個(gè)樣品，500ml本品約檢測5000個(gè)樣品。

保存與運輸方法

保存：2-8℃避光保存，2年有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1) 本品含TMB和H2O2，對人體有刺激性，請注意防護。

2) 如發(fā)現本品出現渾濁或顏色變?yōu)樗{色，請停止使用。

3) 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

使用方法（ELISA）

1) 使用之前，取出適量單組份TMB顯色液，使其回到室溫再開(kāi)始使用；

2) 參考ELISA檢測試劑盒的實(shí)驗步驟，當與HRP標記抗體孵育一段時(shí)間后，用適當洗滌液洗滌3-5次，每次3-5min。

3) 洗滌完畢后，去除洗滌液，加入100μl單組份TMB顯色液。

4) 室溫避光孵育5-30min或更長(cháng)時(shí)間（可長(cháng)達24h），直至顯色到預期深淺?！咀⒁狻浚航ㄗh根據實(shí)驗需求選擇最佳試劑用量、顯色時(shí)間和反應溫度。

5) 直接在370nm測定吸光度?；蛘呒尤?00μl 0.5-2M H2SO4終止反應，隨后在450nm測定吸光度。

常用問(wèn)題

1. 背景顯色太深

1）如果背景（沒(méi)有樣品的對照）顯色太深，一方面需考慮使用適當的封閉液進(jìn)行封閉，如商業(yè)化封閉液或者和一抗相同來(lái)源的血清（10%）進(jìn)行封閉。另一方面，使用經(jīng)過(guò)適當吸附的二抗，以減小二抗的非特異性吸附。

2）可以考慮縮短顯色時(shí)間，或降低二抗濃度。另外，選擇適當強度的洗滌液，或延長(cháng)洗滌時(shí)間也會(huì )有所幫助。

2. 沒(méi)有顯色或顯色太弱

1）適當提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果，滴一滴稀釋二抗在離心管內，檢測二抗是否被正常顯色。

2）可以考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如生物素檢測體系。

3）可以適當延長(cháng)顯色時(shí)間。

4）如果上述改進(jìn)不能獲得預期效果，可以考慮更換效果更好的一抗或ELISA試劑盒。

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 — — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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