DAPI Stain DAPI染液

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產(chǎn)品標簽

DAPI 藍色細胞核探針；PI碘化丙啶；Hoechst 33342；Hoechst 33258；7-AAD；CAS：28718-90-3；

產(chǎn)品信息

溫馨提示：見(jiàn)我司整理的細胞核（Cell Nuclear）熒光探針產(chǎn)品專(zhuān)題。

產(chǎn)品描述

DAPI，英文全稱(chēng)4’,6-Diamidino-2’-phenylindole，中文全稱(chēng)4’,6-聯(lián)脒-2’-苯基吲哚，是一種藍色熒光染料，選擇性結合雙鏈DNA的小溝區（優(yōu)先結合AT富集的DNA）形成穩定的復合物，產(chǎn)生比DAPI約強20倍的熒光。DAPI的最大激發(fā)/發(fā)射波長(cháng)為340/488nm，DAPI-DNA復合物的最大激發(fā)/發(fā)射波長(cháng)為364/454nm，通常用作熒光顯微術(shù)、流式細胞術(shù)和染色體染色的細胞核復染劑。由于對DNA的高親和性，DAPI還常常被用在細胞計數、凋亡檢測、支原體污染檢測、基于DNA內含物的細胞分選，以及高內涵成像分析中的核分割工具。雖然高濃度情況下DAPI能夠進(jìn)入活細胞，但DAPI不具細胞膜滲透性，通常情況用來(lái)染固定細胞。對于活細胞染色，Hoechst 33342（貨號：MX4203-10MG）是一種受歡迎的具細胞膜滲透性的核復染劑。

我司提供兩種濃度的DAPI儲存液：一種濃度為1mg/ml（貨號：MX4208-1ML），一種濃度為5mg/ml（貨號：MX4208-200UL）。使用時(shí)根據實(shí)驗應用直接將儲存液用相應溶液稀釋到工作濃度即可。推薦工作濃度通常為0.5-10μg/ml，用于固定的細胞和組織的細胞核染色。

保存與運輸方法

保存：-20℃避光保存，1年有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1）   DAPI對人體有一定刺激性，請注意適當防護。

2）   DAPI儲存液（1-5mg/ml）置于-20℃避光保存，1年穩定。稀釋的工作液（1-5μg/ml），置于+4℃，6個(gè)月穩定。

3）   熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，建議染色后盡量當天完成檢測。

4）   為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

5）   為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1.      工作液配制

用雙蒸水或PBS稀釋母液，配制成所需要的工作濃度（0.5-10μg/ml）。

2.      固定的細胞或組織染色

對于固定的細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑。DAPI染色通常在其他染色的最后進(jìn)行。

如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行DAPI 染色。

2.1對于貼壁細胞或組織切片：加入適量DAPI染色液，覆蓋住樣品即可。

對于懸浮細胞：至少加入待測染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5min。

2.2 吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5min。

2.3 直接在熒光顯微鏡下觀(guān)察或封片后熒光顯微鏡下觀(guān)察。Ex/Em=364/454nm。

常見(jiàn)問(wèn)題

1、   DAPI是一種好的活細胞核標記探針？

回復：DAPI被認為是一種半滲透性/無(wú)滲透性的細胞核染料。對細胞核的染色性能好壞依賴(lài)于細胞系類(lèi)型。某些細胞系可用DAPI染色，某些完全不可以，而某些標記結果不一致。替代的話(huà)，建議用Hoechst 33342（貨號：MX4204-10ML）或Hoechst 33258（貨號：MX4202-10ML），具有同DAPI一樣的波長(cháng)和核酸結合模式，但是有非常好的細胞膜滲透性。

2、   DAPI和Hoechst染料相當類(lèi)似，如何二選一？

回復：DAPI是非常通用的藍色熒光染料，用于細胞核復染。對固定和透化的細胞/組織，具有非常明亮的細胞核標記。然而，此染料被認為是半滲透至不滲透的染料，用于活細胞染色的結合不一致。Hoechst 33342是一種細胞膜滲透性的染料，具有同DAPI的結合機制和熒光特征。非常適合用于活細胞成像，效果就如同DAPI用于固定細胞染色。

3、   有學(xué)者發(fā)現，先進(jìn)行EdU插入的點(diǎn)擊反應后再用DAPI染細胞，比未進(jìn)行點(diǎn)擊反應直接用DAPI染色的信號低，是什么原因導致的？

回復：點(diǎn)擊反應內的銅離子在很少程度上會(huì )變性DNA（雖然變性程度沒(méi)有BrdU檢測那么多），導致DNA染料（包括DAPI和Hoechst染料）的結合能力受到影響。這部分影響僅在經(jīng)典的EdU試劑盒內表現明顯，而對于第二代的EdU試劑盒（使用相對更低濃度的銅離子）基本無(wú)影響。

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