廣譜型蛋白酶抑制劑混合物（不含EDTA，100× DMSO儲液）

產品標簽

AEBSF；Pepstatin A；Roche cOmplete? Protease Inhibitor Cocktail 蛋白酶抑制劑混合物；Pierce Halt Protease Inhibitor Cocktail；Roche PhosSTOP? 磷酸酶抑制劑混合物； PMSF；

產品信息

溫馨提示：見我司（懋康生物）整理的蛋白酶抑制劑cocktail產品專題（含 RochecOmplete?）。

溫馨提示：見我司（懋康生物）整理的磷酸酶抑制劑cocktail產品專題（含 RochePhosSTOP?）。

溫馨提示：見我司（懋康生物）整理的單一蛋白酶/磷酸酶抑制劑產品專題。

產品描述

細胞內源蛋白的表達和降解一般維持平衡狀態，因此正常生理條件下內源蛋白含量相對穩定。然而體外研究中，蛋白合成過程終止，而細胞裂解得到的粗提物含大量的內源性蛋白酶，依然能發揮蛋白水解活性，影響蛋白得率，進而干擾相關蛋白表達和功能研究。因此，為了防止蛋白純化過程的蛋白不被這些蛋白酶降解，需要加入蛋白酶抑制劑來抑制其活性。

本品是多種常見蛋白酶抑制劑的混合物，包含AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin、Pepstatin，廣譜抑制來源于原代細胞、哺乳動物細胞、動植物、細菌、酵母等組織或細胞等裂解物中的多種蛋白酶活性。本品不含EDTA（一種金屬蛋白酶抑制劑），適用于活性中心為金屬離子依賴性蛋白的研究。本品兼容于后續的固定化金屬離子親和層析（Immobilized metal-chelate affinity chromatography, IMAC）、2-D 凝膠電泳以及天然凝膠電泳等蛋白分析研究。

本品以100× DMSO儲存液的形式提供，適用于蛋白純化，蛋白免疫印跡（Western Blot），免疫（共）沉淀（IP/Co-IP），蛋白下拉（Pull-down assay），免疫熒光（IF），免疫組化（IHC），以及激酶研究等多種實驗。

產品成分

保存與運輸方法

保存：-20℃凍存，1年有效。

運輸：冰袋運輸。

使用方法

1）使用前室溫平衡直至完全溶解【注意：DMSO低溫下融化較慢，建議25℃下融化】，低速震蕩以保證各成分均勻。

2）按照1:100的比例（體積比）加到適量抽提試劑（比如細胞或組織裂解液），混勻，再進行樣品蛋白的提取?；蚋鶕嶒災康囊约八囵B的特定細胞和組織，對使用比例進行摸索和優化?！咀ⅰ浚喊凑?:100建議比例，1ml本品可以抑制從20g濕重細胞裂解獲得的蛋白酶活性。

注意事項

1）傳統蛋白酶抑制劑（比如：AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin）不能夠抑制某些去泛素化（DUB）蛋白酶（如ATAXIN-3）的功能 【來源文獻：Neil D. Rawlings, Guy Salvesen et al. Handbook of Proteolytic Enzymes, Vol.1, 2012】。

2）本品具廣譜蛋白酶抑制活性，不具有磷酸酶抑制活性。若需要進行磷酸化蛋白研究，請選擇廣譜型磷酸酶抑制劑混合物（100×儲液）（貨號：MP1612）來滿足實驗要求。

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

常見問題

1. 為什么要用蛋白酶抑制劑混合物（Protease Inhibitor Cocktail）？

本蛋白酶抑制劑混合物屬于低毒且全面型的蛋白保護試劑，最大限度保護蛋白使其免于被內源性蛋白酶降解。目前對微量表達蛋白如信號通路蛋白，受體蛋白，使用免疫共沉淀（Co-IP），蛋白下拉（Pull-down assay）等來獲取樣品，此時蛋白酶抑制劑混合物的加入尤為重要，因其比單一抑制劑（比如PMSF）更為有效。

2. 蛋白酶抑制劑混合物（Protease Inhibitor Cocktail）是否能進一步稀釋使用？

蛋白酶活性抑制效果和眾多因素有關，比如目標蛋白降解的難易程度，蛋白酶類型和濃度，蛋白酶活性高低，以及抑制劑的濃度都會影響最終的保護效果。本品采用經典濃度配比，確保對不同類型的蛋白酶都有充分的抑制效果，建議按照建議比例（1:100）稀釋使用。如果有使用其他品牌的蛋白酶抑制劑混合物，以更低的濃度達到良好的效果，可參照相應比例來進行實驗。建議在推薦比例使用上達到理想效果的基礎上，可做進一步稀釋的摸索和測試。

3. 傳統實驗常用PMSF來保護蛋白，蛋白酶抑制劑混合物（Protease Inhibitor Cocktail）與其相比有何優勢？

PMSF（苯甲基磺酰氟，CAS：329-98-6）是經典的絲氨酸蛋白酶抑制劑，廣泛用于細胞裂解純化蛋白過程。然而，其具有許多明顯的缺點，逐步被保護效果更好且更安全的單一蛋白酶抑制劑或蛋白酶抑制劑混合物所替代。主要缺點1）毒性較高，半致死量為200mg/kg；而其替代物AEBSF，半致死量為2834mg/kg，毒性遠低于PMSF十四倍多，同時保持相當的抑制效果，且對很多種絲氨酸蛋白酶的抑制比PMSF更迅速；2）半衰期短，在水溶液中只有30min，細胞裂解過程中太容易失效。而蛋白酶抑制劑cocktail不僅僅保護全面且效果持續更加久。

4. DMSO是否會對實驗結果產生副作用？

DMSO（二甲基亞砜）基本不會影響實驗結果。生物科學領域DMSO為很多生物活性物質的有機溶劑，比如蛋白結晶，免疫共沉淀等要求較高實驗中也會使用DMSO。細胞研究中，低溫條件下DMSO還是一種廣泛使用且優秀的細胞冷凍保護劑。

常見蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑：

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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