Bradford Protein Quantification Kit

Bradford蛋白濃度測定試劑盒

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

目前，最常用的蛋白濃度檢測方法是：BCA蛋白定量試劑盒（BCA Protein Assay Kit）和Bradford蛋白定量試劑盒（Bradford Protein Assay Kit）。與蛋白濃度測定的其他方法（比如：BCA法和Lowry法）相比，Bradford法更簡(jiǎn)單、更穩定、兼容性更好。Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，尤其是還原劑的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達1M，DTT的濃度可高達5mM，但本法受高濃度去垢劑的影響明顯，需確保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20、60、80低于0.015%。含高濃度去污劑的蛋白定量，建議采用BCA蛋白定量試劑盒（MP1902-500T）。

本Bradford蛋白定量試劑盒（Bradford Protein Assay Kit）的檢測原理是：在酸性乙醇溶液中，考馬斯亮藍G250（Coommassie Brilliant Blue G250）與蛋白結合顏色由棕色變?yōu)樗{色，溶液的最大吸收峰從465nm遷移到595nm，顏色的變化與蛋白濃度成正比，因此，可通過(guò)檢測595nm處的吸光度對溶液中蛋白濃度進(jìn)行測定。本試劑盒檢測速度很快，少量樣品一般只需10min即可完成檢測，檢測濃度下限達到25μg/ml，最小檢測蛋白量達到0.5μg，待測樣品體積為1～20μl，在50~1000 μg/ml濃度范圍內有較好的線(xiàn)性關(guān)系。

產(chǎn)品組分

保存與運輸方法

保存：室溫保存，1年有效。蛋白標準配制成溶液后應置于-20℃保存。

運輸：室溫運輸。

自備材料

1. 酶標儀或分光光度計、96孔板或比色杯、離心機、離心管

2. 蒸餾水、0.9% NaCl或PBS

使用方法

1. 蛋白標準品的準備

1.1 取1ml蛋白標準配制液加入到20mg蛋白標準BSA中，充分溶解后配制成20mg/ml的蛋白標準溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白標準溶液應-20℃長(cháng)期保存。

1.2 取適量20mg/ml蛋白標準，稀釋至終濃度為0.5mg/ml或所需濃度。例如取25μl 20mg/ml蛋白標準，加入975μl稀釋液，充分混勻，即可配制成0.5mg/ml蛋白標準?！咎貏e提示】：待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中。但為了簡(jiǎn)便起見(jiàn)，一般也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標準品。稀釋后的0.5mg/ml蛋白標準可以-20℃長(cháng)期保存。

2. 蛋白濃度的測定

2.1 將標準品按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板或EP管中，加標準品稀釋液補足至20μl，相當于標準品濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。

2.2 加適當體積樣品到96孔板或EP管中。如果樣品不足20μl，加標準品稀釋液補足到20μl，需注意記錄樣品體積。

2.3 各孔加入200μlG250染色液，室溫放置3~5min。

2.4 酶標儀或分光光度計測定595nm波長(cháng)處的吸光度（OD值），如無(wú)595nm，560～610nm波長(cháng)范圍的吸光度也可。

2.5 根據BSA標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的OD值即最終的讀數），繪制標準曲線(xiàn)。依據標準曲線(xiàn)和使用樣品體積計算樣品的蛋白濃度。

注意事項

1） G250染色液回復至室溫充分混勻后使用，有利于提高檢測的靈敏度，加完G250染色液后，盡量在30min內完成吸光度的測定，防止沉淀形成后影響實(shí)驗結果。

2） 蛋白標準在全部溶解后先混勻，再稀釋成一系列不同濃度的蛋白標準。

3） 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否則待測蛋白與蛋白標準所含非蛋白成分不一致，有可能導致測定不準確。

4） 建議每次測定都做標準曲線(xiàn)。因為測定時(shí)顏色會(huì )隨著(zhù)時(shí)間的延長(cháng)不斷加深，并且顯色反應的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應的時(shí)間和溫度，否則如需精確測定宜每次都做標準曲線(xiàn)。

5） 如果沒(méi)有酶標儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但應考慮根據比色杯的最小檢測體積。應按比例適當加大G250染色液、樣品和標準品的用量使總體積不小于最小檢測體積，使用分光光度計測定蛋白濃度時(shí)，每個(gè)試劑盒可以測定的樣品數量可能會(huì )顯著(zhù)減少。

6） 用比色杯測定蛋白含量時(shí)，由于考馬斯亮藍易結合石英比色杯，應優(yōu)先選用一次性塑料比色杯，如用玻璃比色杯，比色完畢后應立即用乙醇清洗干凈。

7） 試劑開(kāi)封后請盡快使用，以防影響后續實(shí)驗效果。

8） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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