TOP10F` Chemically Competent Cell

大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細胞

產(chǎn)品標簽：

TOP10F`；TOP10；F′附加體（F′ episome）；F-TOP10；IPTG；卡那霉素；鏈霉素；

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產(chǎn)品組分：

菌株描述

TOP10F`菌株來(lái)源于TOP10菌株，除了F′附加體（F′ episome）的引入。F′附加體攜帶四環(huán)素抗性基因，使其能從攜帶f1復制子的載體中純化單鏈DNA。F′附加體還攜帶lacI<sup>q</sup>抑制子，參與IPTG作為誘導劑對trc，tac和lac啟動(dòng)子的誘導表達。TOP10F`菌株進(jìn)行藍白斑篩選，需要IPTG誘導β-半乳糖苷酶基因的表達。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。適用于高效克隆和質(zhì)粒擴繁。

TOP10F`菌株基因型：F′{lacIq Tn10 (Tet^R)} mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nupG

產(chǎn)品描述

本品是大腸桿菌TOP10F`菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，經(jīng)pUC19載體檢測轉化效率＞10⁸ cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個(gè)月轉化效率不發(fā)生改變。

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個(gè)月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1） 感受態(tài)細胞必須用干冰運輸。感受態(tài)細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，否則會(huì )減低感受態(tài)細胞的轉化效率。

2） 最好在冰上融化感受態(tài)細胞。在冰上融化后立即加入目標DNA，不可在冰上放置時(shí)間過(guò)長(cháng)。長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率，混入目的DNA時(shí)需輕柔操作。

3） 進(jìn)行轉化操作時(shí)，需在相應溫度及無(wú)菌條件下進(jìn)行。

4） 為防止轉化實(shí)驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到最低。

5） 產(chǎn)品包裝內含載體pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實(shí)驗用。

6） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無(wú)菌條件的標準下進(jìn)行】

1.1 將TOP10F`感受態(tài)細胞從-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物），并用手撥打管底輕輕混勻，冰中靜置25min。

1.2 42℃水浴熱激45s，迅速放回冰上并靜置2min。 此過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。

1.3 向每個(gè)離心管中加入700 μl無(wú)菌的2YT或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養60min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

1.4 低速離心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含相應抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養基上，用無(wú)菌的涂布棒將細胞均勻涂開(kāi)，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，之后倒置放于37℃過(guò)夜培養。如果進(jìn)行藍白斑篩選，37℃至少培養13h。

【注意】：

a）涂布用量可根據具體實(shí)驗調整。若轉化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，則通過(guò)離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。

b）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過(guò)少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進(jìn)行培養。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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