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        當前位置: 首頁> 產品中心> 細胞生物學 > 細胞轉染 > CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit CPFect小分子RNA轉染試劑盒
        CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit CPFect小分子RNA轉染試劑盒
        目錄號 MX2216-1KIT 售價 2950.00元
        規格 1kit 運輸溫度 室溫運輸
        其他名稱 保存溫度 4℃保存
        CAS號 N/A 有效期 1年
        應用 訂購數量
        產品簡介:

        CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit

        CPFect小分子RNA轉染試劑盒

        產品信息

        產品名稱

        產品編號

        規格

        價格(元)

           CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit

              CPFect小分子RNA轉染試劑盒

            MX2216-0.5KIT  

        0.5kit

        1580

        MX2216-1KIT

        1kit

        2950

        產品描述

        CPFect小分子RNA轉染試劑盒CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit)是一款專門開發用于小分子RNA(比如siRNA、miRNA)的轉染試劑盒,含有轉染所需的轉染試劑,以及轉染緩沖液。本品具極好的生物相容性、轉染效率高、細胞毒性小。轉染時無需進行培養基更換操作,特別適合各種高通量細胞篩選實驗、方便、快速、高效。

        試劑盒組分

        組分編號

        組分名稱

        貨號(規格

        MX2216-0.5KIT

        MX2216-1KIT

        MX2216-A

        CPFect siRNA/miRNA Transfection Reagent

        0.5ml

        2×0.5ml

        MX2216-B

        10× CPFect Transfection Buffer

        0.5ml

        2×0.5ml

        保存與運輸方法

        保存:+4℃保存,1年有效。

        運輸:室溫運輸。

        注意事項

        1)使用高純的DNARNA有助于獲得較高的轉染效率,內毒素是影響轉染效率高低的重要因素。

        2轉染過程中不要添加抗生素到培養基,否則會導致細胞死亡。

        3CPFect siRNA/miRNA Transfection ReagentMX2216-A應該在4℃保存,不可凍存。

        4)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

        使用方法

        一、準備工作

        1.1 從冰箱內取出 CPFect siRNA/miRNA Transfection ReagentMX2216-A后,在漩渦振蕩器中充分振蕩后,室溫放置,使之恢復到室溫后使用。

        1.2 從冰箱內取出10× CPFect Transfection BufferMX2216-B后,取適量按照19的比例用PBS稀釋到,混勻后待用。

        二、轉染方法(以24孔板內轉染siRNA為例)

        2.1 接種細胞

        a. 貼壁細胞(以HeLa細胞為例):轉染前一天,接種1×105~5×105個細胞至含有適量完全培養基的24孔板培養孔中,使轉染時的細胞密度能夠達到30~50%。

        b. 懸浮細胞(以THP-1細胞為例):接種1×105~5×105個細胞至含有適量完全培養基的24孔板培養孔中。

        【注意】:

        1)不同細胞生長速度不同,接種細胞的數量,細胞密度需要依據細胞類型、培養時間、實驗目的而定;

        2)每孔接種的細胞數量盡量相同,使細胞均勻分布。

        3)由于自身特性問題,懸浮細胞相對較難轉染,需要優化條件以提高轉染效率,如遇細胞特殊,可更換為電轉方式。

         

        2.2 轉染步驟

        對于每個轉染樣品,請按以下步驟準備:

        a. 稀釋 siRNA 30μl 1×CPFect Transfection Bufferv2)稀釋 1.25μl 20μM siRNA 儲存液(v3),輕輕混勻,室溫孵育 5min。

        b. 混合液制備:加入 3μl CPFect siRNA/miRNA Transfection Reagentv4),輕輕吹打混勻,室溫孵育 015min,制備成轉染復合物。

        【注意】:

        1)請不要振蕩,溶液可能會有渾濁,但不會影響轉染;

        2)混合液可室溫放置一段時間,但不宜超過 24h。

        c. CPFect轉染復合物加入到適量無雙抗完全培養基(v1)中,輕輕混勻。

        【注意】:CPFect轉染復合物加入原細胞培養基中一般無需移除或更換。但也可依具體實驗情況進行優化。 d. (可選)進行其他必要的特殊處理(如加藥處理) ;

        e. 將培養板置于 37℃、CO2培養箱中培養24~96h(培養時間與實驗目的相關)。

         

        2.3 效果檢測

        轉染完成后 24~72小時均可進行siRNA沉默效果檢測,最佳檢測時間與細胞類型,轉染試劑,檢測目的等相關。

        1RNA水平的檢測(RNAi沉默鑒定標準):siRNA作用的目標分子是目的基因的RNA,在RISC系統的作用下剪切目標RNA,故檢測目的基因的RNA水平可直接反應siRNA是否發揮相應作用,且通過qRT-PCR可計算具體的抑制效率。一般siRNA轉染后 24~72h即可檢測到目的基因RNA表達明顯降低。

        【注意】:引物設計質量很重要,需要確保檢測引物有效性。

        2)蛋白水平的檢測:對于蛋白編碼基因,還需檢測相應的蛋白表達水平,以確定是否目的蛋白也成功下調。由于蛋白表達水平的變化受多個因素影響,有時候會出現RNA水平成功抑制了而蛋白水平變化不明顯的情況。若蛋白表達水平下降不明顯,需認真檢測其mRNA的表達水平,用來判斷RNAi不理想的原因。

        3)功能篩選:應用 BrdUEdU細胞增殖,細胞凋亡等方法進行siRNA對細胞功能的直接篩選。

         

        轉染體系的調整參考用表

        I. 不同細胞培養容器轉染時培養基、核酸及轉染試劑用量

         

        siRNA終濃度

        單孔體積

        培養基(v1

        Bufferv2

        siRNAv3

        Reagent (v 4)

        96-well

        100nM

        100μl

        92.90μl

        6μl

        0.5μl

        0.6μl

        50nM

        100μl

        93.15μl

        6μl

        0.25μl

        0.6μl

        30nM

        100μl

        93.25μl

        6μl

        0.15μl

        0.6μl

        20nM

        100μl

        93.30μl

        6μl

        0.1μl

        0.6μl

        10nM

        100μl

        93.35μl

        6μl

        0.05μl

        0.6μl

        24-well

        100nM

        500μl

        464.50μl

        30μl

        2.5μl

        3μl

        50nM *

        500μl

        465.75μl

        30μl

        1.25μl

        3μl

        30nM

        500μl

        466.25μl

        30μl

        0.75μl

        3μl

        20nM

        500μl

        466.50μl

        30μl

        0.5μl

        3μl

        10nM

        500μl

        466.75μl

        30μl

        0.25μl

        3μl

        12-well

        100nM

        1ml

        929.00μl

        60μl

        5μl

        6μl

        50nM

        1ml

        931.50μl

        60μl

        2.5μl

        6μl

        30nM

        1ml

        932.50μl

        60μl

        1.5μl

        6μl

        20nM

        1ml

        933.00μl

        60μl

        1μl

        6μl

        10nM

        1ml

        933.50μl

        60μl

        0.5μl

        6μl

        6-well

        100nM

        2ml

        1858.00μl

        120μl

        10μl

        12μl

        50nM

        2ml

        1863.00μl

        120μl

        5μl

        12μl

        30nM

        2ml

        1865.00μl

        120μl

        3μl

        12μl

        20nM

        2ml

        1866.00μl

        120μl

        2μl

        12μl

        10nM

        2ml

        1867.00μl

        120μl

        1μl

        12μl

        *】:實際參考用量示例,對于部分細胞類型需進一步優化。

         

         — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

         

        上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作,主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承以人為本,以誠為信、合同守信的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。

        電話:021-54736159    傳真:021-54736159    手機:18121428569
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